6個家蠶抗病毒基因在家蠶感染BmNPV和BmBDV后轉(zhuǎn)錄水平研究.pdf

1、家蠶在中國有悠久的養(yǎng)殖歷史，它不僅擁有較高的經(jīng)濟價值，還能作為良好的模式生物擁有較高的科研價值。但是在家蠶的養(yǎng)殖過程中，家蠶容易受到多種因素的影響而造成損失。在我國，由家蠶核型多角體病毒（BmNPV）引起的病毒病占整個病毒病的很大部分，會對家蠶造成極大的危害。家蠶二分濃核病毒（BmBDV）是二分DNA病毒科中第一個被發(fā)現(xiàn)的成員，具有典型性。
　　通過熒光定量PCR方法，研究家蠶抗BmBDV品系798和感性品系306接種BmBDV、

2、抗BmNPV品系NB和感性品系華八（三五）接種BmNPV后一些免疫相關(guān)基因（bmi、argo、dicer、cap1、cap3和car）在家蠶中腸組織中的轉(zhuǎn)錄水平變化情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，雖然這些基因的轉(zhuǎn)錄水平在不同家蠶品系中差異很大， BmBDV和BmNPV的感染對基因轉(zhuǎn)錄水平的影響也有所不同，但存在一個共同的趨勢，即病毒感染能夠負調(diào)控這些基因的轉(zhuǎn)錄水平。在相應(yīng)病毒感染情況下，bmi和dicer在798和306中下調(diào)，在NB和華八（三五）中上

3、調(diào)；argo和cap3在798和306中上調(diào)，在NB中上調(diào)，但在華八（三五）中下調(diào)；cap1在798和306中上調(diào)，在NB和華八（三五）中也上調(diào)；car在798中沒有明顯變化，在306中下調(diào)，在NB中上調(diào)，在華八（三五）中下調(diào)。這些發(fā)現(xiàn)為進一步研究這些基因在病毒感染增殖中的作用打下了良好的基礎(chǔ)。
　　car基因是一個羧酸酯酶基因。以家蠶cDNA作為模版，利用PCR技術(shù)對car基因進行了克隆。將克隆得到的基因片段與克隆質(zhì)粒相連進行擴

4、增，將擴增后的片段與表達質(zhì)粒相連并轉(zhuǎn)入BL21中，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達目的蛋白，目的蛋白主要以包涵體方式存在，將目的蛋白變性后利用Ni-NTA對其純化。將經(jīng)純化的蛋白分為兩部分，一部分用作制備多克隆抗體，將另一部分復(fù)性來用作酶活測定。經(jīng)過4周對小鼠的免疫之后，成功地制備了多克隆抗體血清。經(jīng)酶活測定，發(fā)現(xiàn)在39℃時目的蛋白的酶活最高。
　　利用熒光定量PCR的方法研究了car基因在家蠶不同生長階段和組織中的轉(zhuǎn)錄水平。經(jīng)實驗發(fā)現(xiàn)，脂肪體