dsRNA介導(dǎo)的煙草和番茄抗病毒基因工程研究.pdf

1、浙江大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院博士學(xué)位論文dsRNA介導(dǎo)的煙草和番茄抗病毒基因工程研究姓名：胡瓊申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：周雪平20100120浙江大學(xué)博士學(xué)位論文 d s R N A 介導(dǎo)的煙草和番茄抗病毒基因工程研究抗性測(cè)定表明，轉(zhuǎn)基因煙草中檢測(cè)不到病毒。選擇了抗性強(qiáng)且遺傳性穩(wěn)定的M P l 6 ．1 7 ．2 9 ．9株系，接種病毒后測(cè)定其T 4 代各三株轉(zhuǎn)基因煙草中的T M VR N A 和s i R N

2、 A ，結(jié)果表明轉(zhuǎn)基因煙草在接種前后均能檢測(cè)到信號(hào)很微弱的T M VR N A ，而非轉(zhuǎn)基因煙草接種病毒后存在大量的T M V R N A ；轉(zhuǎn)基因煙草中均能檢測(cè)到2 4 n t S 和2 1n t s 兩種類(lèi)型的s i R N A ，而非轉(zhuǎn)基因煙草在接種前后均檢測(cè)不到s i R N A 。說(shuō)明了轉(zhuǎn)基因煙草的抗病性主要是通過(guò)基因沉默降解病毒R N A 而產(chǎn)生的。進(jìn)一步測(cè)定表明在低溫( 1 5 “ C ) 下T 4 代轉(zhuǎn)基因煙草對(duì)T M

3、V 依舊有很好的抗性。將含部分C M Vg e p ( i ／r ) 基因的農(nóng)桿菌與番茄葉盤(pán)共培養(yǎng)，經(jīng)卡那霉素抗性篩選獲得轉(zhuǎn)部分C M VR e p ( i ／r ) 基因的再生植株，P c R 檢測(cè)發(fā)現(xiàn)在隨機(jī)抽取的轉(zhuǎn)基因番茄中均能擴(kuò)增到特異性條帶，點(diǎn)雜交也均能雜到特異信號(hào)，說(shuō)明獲得了轉(zhuǎn)部分C M V ．R e p 基因的轉(zhuǎn)基因番茄，對(duì)其抗病性進(jìn)行了初步研究。關(guān)鍵詞：黃瓜花葉病毒；煙草花葉病毒；轉(zhuǎn)基因煙草；R N A 沉h 默；d s