抗貓細小病毒基因工程嵌合抗體研究.pdf

1、貓細小病毒(Feline parvovirus，F(xiàn)PV)，又名貓泛白細胞減少癥病毒，屬細小病毒科、細小病毒屬成員?？梢鹭埣柏埧苿游锏姆喊准毎麥p少癥，表現(xiàn)為高熱、頑固性嘔吐、腹瀉、脫水及白細胞嚴(yán)重減少，常造成幼貓的感染和高死亡率。
　　目前臨床對貓細小病毒及犬細小病毒的主要的治療手段依賴于大量注射抗病毒單克隆抗體。鼠源單抗在用于異種動物治療上通常不能有效激活補體和Fc受體相關(guān)的效應(yīng)系統(tǒng)，并且能誘發(fā)抗鼠抗體，使得療效降低并加重了動物

2、免疫系統(tǒng)的負擔(dān)。本研究開發(fā)的基因重組嵌合抗體，用抗貓、犬細小病毒的單克隆抗體的可變區(qū)替換犬天然抗體的可變區(qū)，使重組嵌合抗體在保留單克隆抗體的高親和力的基礎(chǔ)上實現(xiàn)犬源化的改造，達到減少抗體免疫原性的目的，提高抗體在臨床上的療效。
　　本研究通過聚乙二醇法融合FPV免疫小鼠脾臟的細胞與SP2/0細胞，通過免疫熒光(IFA)鑒定、中和實驗鑒定，獲得一株單克隆抗體3A8，經(jīng)鑒定該單抗具有與FPV和CPV的中和活性。同時研究并分析了犬天然抗

3、體的可變區(qū)、恒定區(qū)的位置和次級的結(jié)構(gòu)和分區(qū)?？寺慰寺】贵w可變區(qū)基因及犬抗體的恒定區(qū)基因，嵌合兩部分基因得到重組抗體基因。將重組抗體基因克隆至真核表達載體pFastBac-Dual桿狀病毒穿梭載體質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化DH10Bac感受態(tài)，再通過提取重組桿粒DNA，轉(zhuǎn)入昆蟲細胞進行真核表達。并對表達的重組嵌合抗體進行SDS-PAGE、Western-blot、非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳實驗和免疫熒光實驗對表達的嵌合抗體進行鑒定。
　　通過上述實