抗人肝癌基因工程抗體嵌合IgG和嵌合Fab的構(gòu)建和表達(dá).pdf

1、目的: 利用大腸桿菌高效表達(dá)肝癌相關(guān)抗原HAb18G胞外區(qū)片段,并分析其與相應(yīng)抗體的結(jié)合活性,進(jìn)而明確表達(dá)產(chǎn)物用于鑒定和篩選基因工程抗體的可行性.設(shè)計(jì)引物分別克隆抗人肝癌單抗HAb18 Fd和輕鏈基因以及輕、重鏈可變區(qū)基因V<,H>和V<,L>,并構(gòu)建成Fab抗體的形式對(duì)其可靠性和準(zhǔn)確性進(jìn)行驗(yàn)證.之后,利用克隆的抗體基因構(gòu)建嵌合IgG抗體表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染SP2/0細(xì)胞進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)、純化和鑒定.將輕、重鏈可變區(qū)基因V<,L>和V<,H>先后

2、克隆入一個(gè)人鼠嵌合Fab抗體的通用載體,構(gòu)建成cFab的分泌性表達(dá)載體,在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)、純化和鑒定.同時(shí)分別構(gòu)建cFd和cL的原核非融合表達(dá)載體,誘導(dǎo)表達(dá)后,進(jìn)行cFab復(fù)性的研究和產(chǎn)物鑒定.最終,對(duì)制備的三種基因工程抗體的抗原結(jié)合能力進(jìn)行鑒定和初步比較. 結(jié)論:1.成功表達(dá)的HAb18G胞外區(qū)片段融合蛋白可以替代天然的HAb18G,以用做抗原來(lái)鑒定和篩選新型的基因工程抗體.2.成功克隆了HAb18Fd和輕鏈基因以及輕、重鏈可