雞干擾素α和γ在家蠶中的表達(dá)及其抗病毒活性檢測(cè).pdf

1、隨著養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展，雞類疾病的防治越來越引起人們的重視。干擾素是一類多功能的細(xì)胞因子，在抗病毒、腫瘤和寄生蟲方面都有良好的使用效果，對(duì)各種養(yǎng)雞業(yè)常見的疾病，如新城疫、禽流感等都有良好的治療作用。因此，開發(fā)高活性的雞干擾素制品用于雞類疾病的防治具有良好的應(yīng)用前景。
　　本研究選取GenBank數(shù)據(jù)庫中的ChIFN-α（GenBank:NM_205427.1）和ChIFN-γ(GenBank:NM_205149.1)基因序列，按家蠶密碼

2、子偏好性對(duì)其進(jìn)行優(yōu)化。利用OptimumGeneTM方法，將ChIFN-α基因和ChIFN-γ基因的CAI值分別提高到0.88和0.89，調(diào)整ChIFN-α基因和ChIFN-γ的GC含量分別為49.13％和42.79％。同時(shí)，替換掉序列中的稀有密碼子和能使mRNA產(chǎn)生發(fā)夾結(jié)構(gòu)的密碼子，并去除原始序列中的常用限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)，然后采取化學(xué)合成法合成用于表達(dá)的完整的ChIFN-α和ChIFN-γ序列。將合成的ChIFN-α和ChIFN-

3、γ序列插入桿狀病毒基因組形成重組病毒，利用桿狀病毒多基因表達(dá)技術(shù)在家蠶體內(nèi)共表達(dá)ChIFN-α和ChIFN-γ。表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)Western blotting檢測(cè)，證明ChIFN-α和ChIFN-γ成功在家蠶內(nèi)表達(dá)。利用CEF/VSV-GFP系統(tǒng)檢測(cè)表達(dá)產(chǎn)物的抗病毒活性，發(fā)現(xiàn)家蠶共表達(dá)的ChIFN-α和ChIFN-γ效價(jià)可達(dá)7.64×106U/mL。利用空斑篩選法篩選重組病毒，測(cè)得最高表達(dá)量的重組病毒共表達(dá)的ChIFN-α和ChIFN-γ的

4、效價(jià)可達(dá)1.78×107U/mL，將表達(dá)量提高了約2.3倍。同時(shí)，檢測(cè)了實(shí)驗(yàn)室利用桿狀病毒單獨(dú)表達(dá)的ChIFN-α以及ChIFN-γ的抗病毒活性。ChIFN-α的抗病毒活性為3.66×106U/mL，ChIFN-γ的抗病毒1.73×106U/mL。對(duì)家蠶表達(dá)的ChIFN-α進(jìn)行了初步純化，結(jié)果表明經(jīng)酸變性純化后可初步去除掉蠶蛹中60kDa左右的雜蛋白，ChIFN-α主要存在于變性后收獲的上清中。
　　本研究利用家蠶桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)