對蝦RhoA基因在抗病毒免疫中的作用初步研究.pdf

1、對蝦白斑綜合癥病毒(White Spot Syndrome Virus，WSSV)是一種具有囊膜、無包涵體的桿狀型雙鏈環(huán)狀DNA病毒，也是危害對蝦養(yǎng)殖業(yè)的最主要病原。RhoA屬于小GTPase蛋自家族的一員，它在細(xì)胞中存在著GTP結(jié)合和GDP結(jié)合兩種形式，在細(xì)胞內(nèi)起著分子開關(guān)的作用，可調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架、影響細(xì)胞極性、微管活力、細(xì)胞膜運(yùn)輸途徑和轉(zhuǎn)錄因子活性調(diào)節(jié)。有報(bào)道一些病毒蛋白可以和RhoA結(jié)合阻斷其下游信號(hào)途徑ROCK和mDia等因子，從

2、而對病毒的釋放，形態(tài)及病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞運(yùn)動(dòng)產(chǎn)生影響。 本實(shí)驗(yàn)室之前的工作利用抑制性差減雜交(Suppression Subtractive Hybridization，SSH)，發(fā)現(xiàn)了抗病毒蝦中PjRhoA的表達(dá)量增強(qiáng)。本論文首先克隆了PjRhoA基因的全長，對該基因序列進(jìn)行了生物信息學(xué)分析，該基因包含RhoA家族必須的GTP結(jié)合域，ROCK結(jié)合位點(diǎn)，以及GAP，GEF and GDI結(jié)構(gòu)域。蛋白序列比對發(fā)現(xiàn)其與其他六種模式動(dòng)物之

3、間的同源性高達(dá)92.98％。通過RT-PCR檢測各個(gè)組織中PjRhoA的分布，發(fā)現(xiàn)該基因在對蝦心臟、肌肉、肝胰腺、腸、腮和血液中都有分布，病毒感染不同時(shí)相檢測該基因表達(dá)量變化發(fā)現(xiàn)該基因在病毒感染12小時(shí)后表達(dá)量增加，感染48小時(shí)達(dá)到最高，之后又減少。dsRNA干擾通過活體注射雙鏈RNA在mRNA水平上抑制RhoA，病毒極早期基因的表達(dá)量增加。用RhoA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑下游ROCK的特異性抑制劑Y-27632抑制其信號(hào)通路，抑制狀態(tài)下病毒極早