格爾德霉素的抗病毒作用及其相關(guān)基因的研究.pdf

1、目的： 格爾德霉素作為一種苯醌安莎霉素類抗生素，是熱休克蛋白90的特異性抑制劑。GA與Hsp90結(jié)合可以抑制其伴侶功能的發(fā)揮，促進(jìn)Hsp90配體蛋白廣泛降解，并改變它們的細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運。GA即具有抗腫瘤作用，也具有廣譜的抗病毒作用，但其抗病毒作用的機制尚未闡明。本研究在確定GA抗病毒作用的基礎(chǔ)上，采用基因芯片技術(shù)來確定GA抗病毒作用的可能相關(guān)基因。 方法： 用單純皰疹病毒Ⅰ型（HSV-1）和柯薩奇B組病毒（CBV）感

2、染HeLa細(xì)胞，通過噬斑形成實驗測定不同藥物濃度對病毒產(chǎn)量的影響。用G418篩選穩(wěn)定表達(dá)SARS冠狀病毒N蛋白的293細(xì)胞單克?。?93-N），以正常293細(xì)胞為對照，用流式細(xì)胞技術(shù)分析SARS-N蛋白對細(xì)胞周期的作用，以及GA對SARS-N蛋白引起的細(xì)胞抑制作用的影響。用基因芯片分析了未處理的HeLa細(xì)胞、GA處理的HeLa細(xì)胞（1μM，24hr）、HSV-1感染的HeLa細(xì)胞（24hr），以及GA處理的HSV-1感染的HeLa細(xì)胞（

3、1μM，24hr）這四種細(xì)胞轉(zhuǎn)錄譜的變化，并用半定量RT-PCR對基因芯片結(jié)果進(jìn)行驗證。 結(jié)果： GA可以有效地抑制HSV-1和CBV的復(fù)制。當(dāng)GA濃度為0．625μM時，細(xì)胞內(nèi)HSV-1的滴度降低了104，CBV的滴度降低了103。SARS-冠狀病毒N蛋白使細(xì)胞出現(xiàn)S-G2期的阻滯，GA還可以抵抗這種細(xì)胞周期的阻滯作用，使細(xì)胞恢復(fù)正常的周期?；蛐酒Y(jié)果顯示GA對細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄譜有顯著性影響，其中GA上調(diào)、HSV-1下調(diào)