鴨跖草提取物抗病毒作用的研究.pdf

1、目的：
　　 采用了滲漉技術(shù)和離子交換技術(shù)，對鴨跖草中生物堿進(jìn)行提取。用鴨跖草提取物做體內(nèi)及體外的抗病毒實驗，并且通過與空白對照及陽性藥藥效比較，評價鴨跖草提取物抗病毒的作用。進(jìn)一步證明開發(fā)鴨跖草抗病毒作用的價值。
　　 方法：
　　 1、流感病毒A型H2N3株致小白鼠半數(shù)死亡(LD50)測定：
　　 將培養(yǎng)到得的流感病毒A型H2N3病毒進(jìn)行10倍連續(xù)的稀釋即濃度從10-1～10-8，每個濃度接種4只小白

2、鼠，接種方式為鼻吸和腹腔注射，給藥后觀察2周，保持實驗室內(nèi)通風(fēng)，食物照常供給。根據(jù)小白鼠發(fā)病以及死亡情況，計算出半數(shù)致死量(LD50)值。
　　 2、小白鼠體內(nèi)抑病毒試驗：
　　 實驗共設(shè)有6組，每組小白鼠10只，設(shè)置鴨跖草提取物3個劑量組，即大劑量組、中劑量組和小劑量組。其他的組為病毒唑治療組，病毒感染組和正常對照組。給藥前實驗器材常規(guī)消毒，室內(nèi)保持通風(fēng)，維持溫度20℃左右，維持相對濕度60％。鴨跖草提取物給藥組腹腔注

3、射，病毒組劑量采用致死劑量0.4ml/只，經(jīng)鼻吸入及腹腔注射種入病毒，病毒唑組腹腔注射給藥，所有治療組連續(xù)給藥7天。食物照常供給。每日觀察動物的反?，F(xiàn)象，比如矗毛、呆滯、耳末稍有充血現(xiàn)象等，觀察死亡時間和死亡數(shù)。所有動物用藥后連續(xù)觀察2周，然后處死，解剖取出肺組織，稱量每組小白鼠的體重及肺重，計算出肺指數(shù)。將肺部組織勻漿，然后將其接種到雞胚中，過2～4天后收集被種植雞胚的尿囊液，按倍比稀釋后同雞紅細(xì)胞懸液混合，1小時后觀察紅細(xì)胞凝集情況

4、，計算出病毒血凝滴度。
　　 3、體外抗流感病毒試驗：
　　 將Vero細(xì)胞放在96孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)，然后加入100 TCID50病毒液，在，37℃的溫度下通入5％CO2吸附1h，將多余的病毒液去除，加入5個濃度的鴨跖草提取物，首個濃度為1280 ug/ml，其余濃度0.25倍稀釋得到。即分別為1280 ug/ml、320 ug/ml、80 ug/ml、20 ug/ml、5ug/ml，設(shè)4個組，病毒對照，細(xì)胞對照，鴨跖草提

5、取物和陽性藥物對照組。將每一組在37℃時通入5％CO2培養(yǎng)，然后觀察細(xì)胞病變，記錄病變程度，當(dāng)病毒對照細(xì)胞病變達(dá)75％以上時實驗停止，最后通過MTT法檢測病毒抑制率。
　　 4、小鼠肺組織勻漿做ELISA試驗：
　　 該試劑盒采用的是雙抗體夾心法，先把小鼠的肺組織勻漿液，按試劑盒操作方法測出方法6個組的OD值。OD值的大小即代表病毒抗原的多少，反應(yīng)了病毒被藥物抑制的程度。
　　 結(jié)果：
　　 1(LD50

6、)測定：小白鼠感染病毒后，經(jīng)過短暫潛伏期(7天左右)，便進(jìn)入發(fā)病狀態(tài)。經(jīng)滴定該病毒的半數(shù)致小白鼠死亡毒力(LD50)為10-5.5/0.2ml。
　　 2體外試驗結(jié)果表明，鴨跖草提取物在體外具有明顯的抑制流感病毒的作用，與具有抗流感病毒作用的病毒唑比較，抑制流感病毒作用無明顯差異(P＞0.05)。鴨跖草提取物體內(nèi)試驗中各劑量組對小鼠的肺指數(shù)均顯著低于病毒模型組，P＜0.01；存活率和平均存活時間，各組動物間顯示出明顯差異，與已知

7、具有治療效果的病毒唑比，P＞0.05。正常對照動物沒有死亡情況。
　　 3測得的OD(樣本的光密度)值與病毒組OD值相比無明顯差異(P＞0.05)。高劑量組與低劑量組有明顯差異P＜0.01
　　 結(jié)論：
　　 鴨跖草提取物體外實驗中有明顯抑制流感病毒的作用，它與陽性藥病毒唑作用比無明顯差異(P＞0.05)，可以判斷鴨跖草提取物體對流感病毒具有一定療效的預(yù)防和治療作用，與病毒唑相當(dāng)，可以作為一種抗流感病毒的中草藥。