氨基葡甘露聚糖抗病毒作用的研究.pdf

1、第一部分AGM抗乙型肝炎病毒的體外實(shí)驗(yàn)研究。 目的：在HepG2．2．15細(xì)胞模型中，觀察AGM對(duì)HBsAg和HBeAg分泌的影響及對(duì)細(xì)胞HBV—DNA合成的抑制作用，以觀察AGM的抗病毒作用。 方法：1．不同濃度AGM作用于HepG2．2．15細(xì)胞后，采用乩ISA法用Abbot診斷試劑盒分別檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中HBsAg、HBeAg的分泌情況，并計(jì)算抑制率。2．用熒光定量PCR方法檢測(cè)AGM處理組和對(duì)照組細(xì)胞培養(yǎng)上清中

2、HBVDNA的含量。3．用MTT法檢測(cè)不同濃度AGM對(duì)HepG2．2．15細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用。 結(jié)果：1.AGM處理組細(xì)胞培養(yǎng)上清中的HBsAg、HBeAg、HBVDNA含量明顯低于藥物未處理細(xì)胞對(duì)照組，其抑制作用隨藥物濃度增加而增強(qiáng)。與對(duì)照組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0．05)。2．MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，隨藥物濃度增加，HepG2．2．15細(xì)胞的存活率與對(duì)照組無顯著性差異(P>O．05)。 結(jié)論：AGM能夠抑制HBsAg、

3、HBeAg的分泌以及HBVDNA的合成，初步顯示AGM的抗病毒活性，為進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。 第二部分氨基葡甘露聚糖抗呼吸道合胞病毒效應(yīng)的體外研究。 目的：在細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)中觀察AGM的抗RSV病毒活性。 方法：人呼吸道合胞病毒常規(guī)培養(yǎng)傳代，空斑單位形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)RSV病毒滴度以選擇合適的病毒感染復(fù)數(shù)；MTT定量比色法觀察AGM對(duì)細(xì)胞CPE形成的影響和AGM的毒性；倒置顯微鏡下觀察AGM對(duì)RSV所致細(xì)胞病變的抑制作

4、用及其對(duì)RSV感染hep-2細(xì)胞后的存活率的影響；病毒空斑減數(shù)實(shí)驗(yàn)考察了AGM處理前后對(duì)病毒滴度的影響，以探討AGM抗RSV活性的效應(yīng)是在病毒吸附入胞環(huán)節(jié)還是在入胞后；RT-PCR方法檢測(cè)AGM對(duì)RSVmRNA表達(dá)的影響；ELISA方法檢測(cè)AGM對(duì)RSV蛋白表達(dá)的影響。 結(jié)果：AGM能夠抑制RSV引起的Hep一2細(xì)胞特異性CPE；空斑減數(shù)實(shí)驗(yàn)證實(shí)在病毒吸附環(huán)節(jié)和入胞后，AGM都能發(fā)揮抗病毒的作用，兩種處理方法病毒空斑抑制率沒有顯