非小細(xì)胞肺癌經(jīng)典HLA-Ⅰ抗原下調(diào)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性及其調(diào)控機(jī)制.pdf

1、目的：探討非小細(xì)胞肺癌(Non-small cel lung cancer，NSCLC)原發(fā)灶、淋巴結(jié)癌轉(zhuǎn)移灶經(jīng)典HLA-I類抗原的表達(dá)及其相關(guān)性，并對(duì)抗原加工機(jī)器組分TAP1、LMP2 mRNA缺陷及原癌基因K-ras點(diǎn)突變、C-erbB-2擴(kuò)增對(duì)NSCLC經(jīng)典HLA-I類抗原表達(dá)的調(diào)控作用進(jìn)行初步探索。 方法：(1)應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)65例NSCLC原發(fā)灶及31例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶經(jīng)典HLA-I類抗原的表達(dá)(正常肺組織及淋巴結(jié)組織

2、作對(duì)照)。(2)應(yīng)用RT-PCR．技術(shù)檢測(cè)31例非小細(xì)胞肺癌原發(fā)灶、3例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶(根據(jù)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其經(jīng)典HLA-I類抗原呈陰性表達(dá)或低表達(dá))’lAPlmRNA、LMP2 mRNA的表達(dá)(經(jīng)典HLA-I類抗原呈陽性表達(dá)的肺癌原發(fā)灶及正常肺組織、淋巴結(jié)組織作對(duì)照)。(3)應(yīng)用差別PCR技術(shù)、PCR-RFLP技術(shù)檢測(cè)65例肺癌原發(fā)灶、31例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶(根據(jù)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其經(jīng)典HLA-I類抗原呈陰性表達(dá)或低表達(dá))C-erbB-2擴(kuò)增及K

3、-ras基因第12位密碼子點(diǎn)突變(正常肺組織及淋巴結(jié)組織作對(duì)照)。并根據(jù)不同的變量類型及目的，分別采用t檢驗(yàn)，Spearman相關(guān)分析，卡方檢驗(yàn)，Logistic回歸分析及Fisher's精確概率法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果：(1)65例肺癌原發(fā)灶中有58例(89.2﹪)表現(xiàn)為經(jīng)典HLA-I類抗原表達(dá)下調(diào)(陰性表達(dá)和低表達(dá))。存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌原發(fā)灶其經(jīng)典HLA-I類抗原的平均表達(dá)率(31.89±9.56﹪)低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移肺癌原

4、發(fā)灶的經(jīng)典HLA-I類抗原的平均表達(dá)率(42.46±10.38﹪)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.57，P>0.05)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶經(jīng)典HLA-I類抗原的表達(dá)率(15.35±6.24﹪)明顯低于肺癌原發(fā)灶(39.68±12.46﹪)(t=2.06，P<0.05)，且與肺癌原發(fā)灶經(jīng)典HLA-I類抗原表達(dá)下調(diào)明顯呈正相關(guān)(r<,s>=0.487．P<0.01)。 (2)經(jīng)典HLA-I類抗原表達(dá)下調(diào)(陰性表達(dá)和低表達(dá))的肺癌原發(fā)灶中，TAP1

5、mRNA表達(dá)率為41.9﹪(13/31)，經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原陽性表達(dá)的肺癌原發(fā)灶TAP1 mRNA表達(dá)率為88.9﹪(8/9)，二者相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P=0.014)。經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原表達(dá)下調(diào)的肺癌原發(fā)灶LMP2 mRNA表達(dá)率為38.7﹪(12/31)，經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原陽性表達(dá)的肺癌原發(fā)灶LMP2 mRNA表達(dá)率為77.8﹪(7/9)，二者相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P=0.039)。經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原表達(dá)下調(diào)的淋巴結(jié)癌轉(zhuǎn)移灶中

6、TAP1 mRNA表達(dá)率為16.1﹪(5/31)，明顯低于肺癌原發(fā)灶(x2=5.01，P<0.05)；LMP2 mRNA表達(dá)率為12.9﹪(4/31)，也同樣低于肺癌原發(fā)灶(x2=5.39，P<0.05)。(3)肺癌原發(fā)灶K-ras基因突變率為23.1﹪(15/65)，在經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原表達(dá)下調(diào)的肺癌原發(fā)灶中表達(dá)，在經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原表達(dá)呈陽性的肺癌原發(fā)灶中不表達(dá)，其在經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原呈陰性表達(dá)的肺癌原發(fā)灶中的表達(dá)率為54.5

7、﹪(6/11)，在呈低表達(dá)的肺癌原發(fā)灶中的表達(dá)率為20﹪(9/45)，存在明顯差異(x<'2>=5.38，P<0.05)。在31例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中，K-ras基因突變率為41.9﹪(13/31)，比肺癌原發(fā)灶高，但差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x<'2>=3.56，P>0.05)。(4)肺癌原發(fā)灶C-erbB-2擴(kuò)增率為32.3﹪(21/65)，在經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原陰性表達(dá)、低表達(dá)、陽性表達(dá)的肺癌原發(fā)灶中均有表達(dá)，其中在經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原陰性表達(dá)

8、與陽性表達(dá)的肺癌原發(fā)灶中，C-erbB-2擴(kuò)增率存在差異(p=0.02)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中亦表現(xiàn)出C-erbB-2擴(kuò)增，擴(kuò)增率為48.4﹪(15/31)，高于肺癌原發(fā)灶，但統(tǒng)計(jì)學(xué)分析無差別(x<'2>=2.32，P>0.05)。經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原陰性表達(dá)與低表達(dá)淋巴結(jié)癌轉(zhuǎn)移組，C-erbB-2擴(kuò)增率比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.18)。結(jié)論：(1)流式細(xì)胞術(shù)可有效檢測(cè)NSCLC癌組織經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原的表達(dá)；存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌原發(fā)灶與無

9、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌原發(fā)灶相比，其經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原表達(dá)無差異；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原的表達(dá)率明顯低于肺癌原發(fā)灶，二者明顯呈正相關(guān)，表明原發(fā)灶中存在經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原表達(dá)下調(diào)的腫瘤細(xì)胞更具轉(zhuǎn)移潛能，經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原表達(dá)下調(diào)是肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的機(jī)制之一。 (2)TAP1、LMP2 mRNA的表達(dá)缺陷是NSCLC原發(fā)灶及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶經(jīng)典HLA-Ⅰ抗原表達(dá)下調(diào)的機(jī)制之一，在淋巴結(jié)癌轉(zhuǎn)移灶表現(xiàn)更明顯。(3)癌基因K-ras突變和C-

10、erbB-2擴(kuò)增與NSCLC原發(fā)灶及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。 方法：應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)65例NSCLC原發(fā)灶及31例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶經(jīng)典HLA-I類抗原的表達(dá)(正常肺組織及淋巴結(jié)組織作對(duì)照)，t檢驗(yàn)比較二者經(jīng)典HLA-I類抗原表達(dá)的差別， Spearman相關(guān)分析比較二者經(jīng)典HLA-I類抗原表達(dá)的相關(guān)性，Logistic多因素回歸分析判定經(jīng)典HLA-I類抗原表達(dá)下調(diào)與肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。 結(jié)果：65例

11、肺癌原發(fā)灶中有58例(89.2﹪)表現(xiàn)為經(jīng)典HLA-I類抗原表達(dá)下調(diào)。存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌原發(fā)灶經(jīng)典HLA-I類抗原的平均表達(dá)率(31.89±9.56﹪)低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌原發(fā)灶(42.46±10.38﹪)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.57，P>0.05)。淋巴結(jié)癌轉(zhuǎn)移灶經(jīng)典HLA-I類抗原的表達(dá)率(15.35±6.24﹪)明顯低于肺癌原發(fā)灶(39.68±12.46﹪)(t=2.06，P<0.05)，且與肺癌原發(fā)灶經(jīng)典HLA-I類抗

12、原表達(dá)下調(diào)明顯呈正相關(guān)(r<,s>=0.487．P<0.01)。Logistic回歸分析顯示，經(jīng)典HLA-I類抗原陰性表達(dá)(OR=2.570，P=0.036)是肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn)因素。 方法：分別應(yīng)用差別PCR技術(shù)、PCR-RFLP技術(shù)檢測(cè)65例肺癌組織、31例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶(根據(jù)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原呈陰性表達(dá)或低表達(dá))C-erbB-2擴(kuò)增及K-ras基因第12位密碼子點(diǎn)突變(正常肺組織及淋巴結(jié)組織作對(duì)照)，應(yīng)用

13、卡方及Fisher′s精確概率法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果：(1)肺癌原發(fā)灶K-ras基因突變率為23.1﹪(15/65)，在經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原表達(dá)下調(diào)的肺癌原發(fā)灶中表達(dá)，在經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原表達(dá)呈陽性的肺癌原發(fā)灶中不表達(dá)，其在呈陰性表達(dá)的肺癌原發(fā)灶中的表達(dá)率為54.5﹪(6/11)，在呈低表達(dá)的肺癌原發(fā)灶中的表達(dá)率為20﹪(9/45)，存在明顯差異(x<'2>=5.38，P<0.05)。在31例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中，K-ras基因突

14、變率為41.9﹪(13/31)，比肺癌原發(fā)灶高，但差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x<'2>=3.56，P>0.05)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原陰性表達(dá)組，K-ras基因突變率為50﹪(11/22)，高于低表達(dá)組22.2﹪(2/9)，但統(tǒng)計(jì)學(xué)差別不明顯(P=0.12)。(2)肺癌原發(fā)灶C-erbB-2擴(kuò)增率為32.3﹪(21/65)，在經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原陰性表達(dá)、低表達(dá)、陽性表達(dá)的肺癌原發(fā)灶中均有表達(dá)，其中在經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原陰性表達(dá)與陽

15、性表達(dá)的肺癌原發(fā)灶中，C-erbB-2擴(kuò)增率存在差異(p=0.02)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中亦表現(xiàn)出C-erbB-2擴(kuò)增，擴(kuò)增率為48.4﹪(15/31)，高于肺癌原發(fā)灶，但統(tǒng)計(jì)學(xué)分析無差別(x<'2>=2.32，P>0.05)。經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原陰性表達(dá)與低表達(dá)淋巴結(jié)癌轉(zhuǎn)移組，C-erbB-2擴(kuò)增率比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.18)。(3)K-ras基因突變和C-erbB-2擴(kuò)增共表達(dá)在65例肺癌原發(fā)灶中共檢測(cè)到12例，占18.5﹪(12/6

16、5)，在經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原陰性表達(dá)組共表達(dá)率為45.5﹪(5/11)，高于經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原低表達(dá)組的15.6﹪(7/45)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(x<'2>=4.69，P<0.05)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中二者共表達(dá)占29﹪(9/31)，高于肺癌原發(fā)灶，但統(tǒng)計(jì)分析無明顯差別(x<'2>=1.37，P>0.05)。二者共表達(dá)在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原陰性表達(dá)組與低表達(dá)組分別為36.4﹪(8/22)、11﹪(1/9)，經(jīng)典HLA-I類抗原陰性