IGF-Ⅰ和bFGF對大鼠髕腱損傷愈合影響的試驗研究及其動物模型的建立.pdf

1、目的:(1)建立大鼠體內(nèi)髕腱損傷模型.(2)觀察類胰島素生長因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)對大白鼠髕腱損傷愈合早期的影響.(3)探討聯(lián)合應用類胰島素生長因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)和堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)對大白鼠髕腱損傷愈合早期是否有協(xié)同作用.(4)觀察類胰島素生長因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)對大白鼠髕腱損傷后期的影響.(5)觀察聯(lián)合應用類胰島素生長因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)和堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)對大白鼠髕腱損傷愈合后期是否有協(xié)同作用

2、.方法:(1)健康雄性Wistar大鼠,年齡8周,體重250-300g,按4.5mg/kg腹腔注射3﹪(w/v)的戊巴比妥溶液麻醉.手術刀切開皮膚和髕腱鞘暴露髕腱,在髕腱中部制成2×4~6mm的窗口型缺損,作為大鼠體外髕腱損傷愈合模型.(2)第一部分:80只雄性Wistar大鼠,隨機分為4組,每組20只,術后3天分別以0,10,50,500ng的劑量局部注射IGF-Ⅰ.手術后7天處死大鼠.第二部分:80只雄性Wistar大鼠,隨機分為4

3、組,每組20只,手術后3d,第一組注射100ul注射用水,第二組注射50ng溶于100ul注射用水的IGF-Ⅰ,第三組注射50ng溶于100ul注射用水的bFGF,第四組注射溶于100ul注射用水的50ngbFGF+50ngIGF-Ⅰ,術后7天處死大鼠.第三部分:80只雄性Wistar大鼠,隨機分為4組,每組20只,各組在手術后3d,10d,17d,分別以0,10,50,500ng的劑量局部注射IGF-Ⅰ3次,術后4周處死大鼠.第四部分

4、:80只雄性Wistar大鼠,隨機分為4組,每組20只,各組分別在手術后3d,10d,17d,第一組注射100ul注射用水,第二組注射50ng溶于100ul注射用水的IGF-Ⅰ,第三組注射50ng溶于100ul注射用水的bFGF,第四組注射溶于100ul注射用水的50ng bFGF+50ng IGF-Ⅰ,術后4周處死大鼠.(3)動物處死后,顯微鏡下直接觀察損傷髕腱的愈合情況,每組10個大鼠髕腱甲醛固定,石蠟包埋,進行增生細胞核抗原(PC

5、NA),Ⅲ型膠原表達的免疫組化染色分析;另10個大鼠髕腱行生物力學和吡啉啶含量的檢測.結論:(1)大鼠髕腱損傷模型可作為研究各種生長因子對肌腱損傷后愈合影響的實驗研究模型.(2)第一部分:局部應用IGF-Ⅰ促進了髕腱愈合初始階段的細胞增生和Ⅲ型膠原表達,但對早期階段的生物力學沒有明顯的影響.第二部分:聯(lián)合應用胰島素生長因子-1(IGF-Ⅰ)和堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)對大白鼠髕腱損傷早期的細胞增生和Ⅲ型膠原表達有協(xié)同作用;而對生

6、物力學無明顯的影響.第三部分:IGF-Ⅰ對大鼠髕腱損傷愈合后期的細胞增生和Ⅲ型膠原表達無明顯的影響,但IGF-Ⅰ對大鼠髕腱損傷愈合后期的細胞增生和Ⅲ型膠原表達無明顯的影響,但IGF-Ⅰ可以影響其愈合后期的生物力學,并且與IGF-Ⅰ的劑量呈明顯的量效關系.第四部分:聯(lián)合應用胰島素生長因子-1(IGF-Ⅰ)和堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)對增加大白鼠髕腱損傷后期的生物力學有協(xié)同作用;但對其細胞增生和Ⅲ型膠原表達無明顯影響.(3)該研究表