5-Aza-CdR通過調(diào)控FXR基因甲基化水平抑制apo(a)表達(dá).pdf

1、目的：探討5-氮雜-2’-脫氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)的DNA去甲基化作用對(duì)HepG2細(xì)胞載脂蛋白(a)[apolipoprotein(a),apo(a)]表達(dá)的影響，并探討其作用機(jī)制。
　　方法：選取apo(a)高表達(dá)細(xì)胞株HepG2細(xì)胞為研究對(duì)象：①M(fèi)TT法測(cè)定HepG2經(jīng)不同濃度(0、10、20、40、80μmol/L)、不同時(shí)間（12、24、48、72、96hr）的5-Aza

2、-CdR處理后細(xì)胞相對(duì)存活率，選取合適藥物作用濃度及作用時(shí)間范圍；②通過Western blot檢測(cè)5-Aza-CdR不同濃度組及處理時(shí)間組HepG2細(xì)胞apo(a)、法尼酯X受體(famesoid X receptor,FXR)的表達(dá)水平，用RT-PCR檢測(cè)apo(a)、FXR的mRNA水平；③采用亞硫酸測(cè)序PCR（Bisulfite Sequencing PCR,BSP）檢測(cè)FXR基因啟動(dòng)子在不同5-Aza-CR濃度組的甲基化水平。

3、
　　結(jié)果：①M(fèi)TT結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L組在12hr、24hr、48hr、72hr各組間細(xì)胞存活率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），而在20μmol/L96hr組、40μmol/L96hr組、80μmol/L24hr組、80μmol/L48hr組、80μmol/L72hr組以及80μmol/L96hr組HepG2細(xì)胞存活率存在明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），選取0-40μmol/

4、L為5-Aza-CdR的安全濃度范圍，0-72hr為合適作用時(shí)間窗；②Western blot結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，5-Aza-CdR呈劑量和時(shí)間依賴性上調(diào)FXR蛋白、下調(diào)apo(a)蛋白表達(dá)表達(dá)，其中以40μmol/L濃度組以及72hr時(shí)間組差異最為明顯（P＜0.05）；③RT-PCR結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，5-Aza-CdR呈劑量和時(shí)間依賴性上調(diào)FXRmRNA、下調(diào)apo(a)mRNA表達(dá)，其中以40μmol/L濃度組以及72hr

5、時(shí)間組差異最為明顯（P＜0.05）；④BSP結(jié)果顯示：隨著5-Aza-CdR濃度的遞增，F(xiàn)XR基因啟動(dòng)子甲基化水平呈下降趨勢(shì)，其中對(duì)照組FXR基因啟動(dòng)子甲基化率為58.3％（7/12），而40μmol/L組FXR基因啟動(dòng)子甲基化率僅為8.3%（1/12）。
　　結(jié)論：1、5-Aza-CdR劑量及時(shí)間依賴性地抑制HepG2細(xì)胞apo(a)表達(dá)；
　　2、5-Aza-CdR通過DNA去甲基化作用促進(jìn) FXR表達(dá),從而下調(diào) apo