5-Aza-CdR對(duì)人胃癌細(xì)胞株生物學(xué)行為及RASSF1AmRNA表達(dá)的影響.pdf

1、目的：通過(guò)利用特異性甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-氮雜2-脫氧胞苷分別作用于人胃癌細(xì)胞系BGC-823、SGC-7901、MKN-28，檢測(cè)其增殖，細(xì)胞周期，凋亡率的變化，和抑癌基因RASSF1AmRNA的表達(dá)。以闡明5-氮雜2-脫氧胞苷對(duì)胃癌細(xì)胞增殖，細(xì)胞周期和凋亡率的影響，及同一抑癌基RASSF1A基因在不同分化程度的胃癌細(xì)胞系的表達(dá)情況。 方法：體外培養(yǎng)人胃癌細(xì)胞系BGC-823、SGC-7901、MKN-28后，分別加入0.4μm

2、ol/L、1.6μmol/L、6.4μmol/L、25.6μmol/L、102.4μmol/L不同濃度的5-Aza-CdR處理24h、48h、72h，用相差顯微鏡動(dòng)態(tài)觀察藥物處理后的三種胃癌細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變;MTT比色法測(cè)24h、48h、72h時(shí)間段的吸光度值，計(jì)算增殖抑制率，流式細(xì)胞儀檢測(cè)5-Aza-CdR對(duì)胃癌細(xì)胞株生長(zhǎng)周期及凋亡的影響，RT-PCR檢測(cè)5-Aza-CdR處理前、后抑癌基因RASSF1AmRNA的表達(dá)。 結(jié)果：

3、 （1）5-Aza-CdR作用于體外培養(yǎng)人胃癌細(xì)胞株BGC-823、SGC-7901、MKN-28后細(xì)胞增殖受到明顯抑制，呈時(shí)間和濃度依賴(lài)性，與對(duì)照組相比,差異有顯著性( P< 0.05 )； （2）SGC-7901細(xì)胞周期分布發(fā)生變化，G0/G1期細(xì)胞數(shù)明顯增多，胃癌細(xì)胞阻滯于G0/G1期，6.4μmol/L、25.6μmol/L、102.4μmol/L濃度組與陰性對(duì)照組比較P<0.05，差異有顯著性。MKN-28細(xì)胞

4、亦阻滯在G0/G1期，6.4μmol/L、25.6μmol/L、102.4μmol/L濃度組與陰性對(duì)照組比較P<0.05，差異有顯著性。BGC-823生長(zhǎng)周期無(wú)明顯的變化。 （3）5-Aza-CdR作用SGC-7901細(xì)胞24h、48h、72h后，72h各藥物濃度組的凋亡率與陰性對(duì)照組比較及組間比較差異均有顯著性( P< 0.05 )，24h、48h各藥物濃度組與陰性對(duì)照組比較差異無(wú)顯著性( P＞0.05 )。MKN-28細(xì)胞7

5、2h后各藥物濃度組與陰性對(duì)照組比較差異有顯著性，25.6μmol/L濃度組與102.4μmol/L濃度組及各濃度組（0.4μmol/L、1.6μmol/L、6.4μmol/L）之間差異有顯著性( P< 0.05 )。24h、48h各藥物濃度組與陰性對(duì)照組比較差異無(wú)顯著性( P＞0.05 )。BGC-823細(xì)胞72h各藥物濃度組的凋亡率與陰性對(duì)照組比較及組間比較差異均有顯著性( P< 0.05 )，24h、48h各藥物濃度組與陰性對(duì)照組比

6、較差異無(wú)顯著性( P＞0.05 )； （4）RT-PCR檢測(cè)人胃癌細(xì)胞株SGC-7901、MKN-28無(wú)RASSF1AmRNA表達(dá)，經(jīng)5-Aza-CdR處理后基因重新表達(dá)，BGC-823處理前后RASSF1AmRNA均有表達(dá)。 結(jié)論： 1、RASSF1A抑癌基因沉默與胃癌的發(fā)生相關(guān)。 2、5-Aza-CdR可以抑制細(xì)胞SGC-7901、MKN-28細(xì)胞的增殖，改變細(xì)胞周期，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。 3、5-