5-Aza-CdR對(duì)MG63骨肉瘤細(xì)胞RASSF1A基因表達(dá)及細(xì)胞繁殖的影響.pdf

1、目的:本研究選擇RASSF1A作為研究目標(biāo)，探討不同濃度的甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-Aza-CdR(5-Aza-2’-deoxycytidine，5-氮雜-2’脫氧胞苷)干預(yù)骨肉瘤細(xì)胞系MG63后對(duì)其RASSF1A抑癌基因mRNA和蛋白表達(dá)及細(xì)胞增殖的影響。
　　 研究方法:
　　 (1)細(xì)胞增殖情況的檢測(cè):培養(yǎng)骨肉瘤MG63細(xì)胞，2-3天傳代一次。取生長(zhǎng)良好的細(xì)胞，分別用不同濃度劑量（0、5、10、50μmol/L）的5-

2、Aza-CdR處理，處理不同時(shí)間(24h、48h、72h、96h)后，MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖情況。
　　 (2)不同濃度5-Aza-CdR處理MG63細(xì)胞系后RASSF1A基因mRNA表達(dá)變化情況:培養(yǎng)骨肉瘤MG63細(xì)胞，并提取細(xì)胞總RNA，采用RT-PCR法擴(kuò)增經(jīng)不同濃度劑量（0、5、10、50μmol/L）5-Aza-CdR處理MG63細(xì)胞系72h后的細(xì)胞RASSF1A基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平。
　　 (3)不同濃度

3、5-Aza-CdR處理MG63細(xì)胞系后RASSF1a蛋白的表達(dá)變化情況:細(xì)胞MG63分別用不同濃度劑量（0、5、10、50μmol/L）的5-Aza-CdR處理72h后，經(jīng)0.2％胰酶處理，離心收集細(xì)胞，經(jīng)western-blot檢測(cè)MG63細(xì)胞系RASSF1a蛋白的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:
　　 (1)細(xì)胞增殖的變化:骨肉瘤細(xì)胞MG63經(jīng)0-50μmol/L5-Aza-CdR誘導(dǎo)96h后，MG63細(xì)胞增殖減少，細(xì)胞生長(zhǎng)

4、速度明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 (2)RASSF1A基因表達(dá)的變化:經(jīng)0-50μmol/L5-Aza-CdR誘導(dǎo)72h后骨肉瘤細(xì)胞MG63的RASSF1A基因表達(dá)經(jīng)RT-PCR及WB檢測(cè)顯著上調(diào)，與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 (3)RASSF1A基因表達(dá)的抑癌作用:研究中我們發(fā)現(xiàn)，5-Aza-CdR處理MG63細(xì)胞系后，細(xì)胞增殖速度明顯下降，同時(shí)RASSF1A基因的轉(zhuǎn)