5-Aza-CdR對腎細胞癌Caki-1細胞生長及E-cadherin基因甲基化的影響.pdf

1、目的:研究5-氮雜-2’-脫氧胞苷(5-Aza-CdR)對人腎癌Caki-1細胞株增殖、凋亡的影響,進一步分析5-Aza-CdR處理對E-cadherin基因甲基化狀態(tài)的影響,初步探討腎癌發(fā)病機制及臨床治療的可行性。
　　 方法:(1)使用不同濃度(10-6、10-5、10-4mol／L)的特異性DNA甲基轉移酶抑制劑(5-Aza-CdR)處理Caki-1腎癌細胞株；(2)四甲基偶氮唑藍(MTT)比色實驗觀察細胞經藥物處理前后的

2、生長活性；(3)甲基化特異性PCR(MSP)法檢測腎癌細胞株經特異性DNA甲基轉移酶抑制劑(5-Aza-CdR)處理前后E-cadherin基因的甲基化狀態(tài)；(4)蛋白質印跡法(Western blot)檢測5-Aza-CdR處理細胞前后E-cadherin蛋白的表達情況。
　　 結果:(1)MTT檢測發(fā)現(xiàn):特異性DNA甲基轉移酶抑NN(5-Aza-CAR)可以明顯抑制Caki-1腎癌細胞的增殖,而且與藥物濃度及作用時間在一定范

3、圍內成正相關(p<0.05)；(2)甲基化特異性PCR(MSP)檢測發(fā)現(xiàn)未經特異性DNA甲基轉移酶抑制劑(5-Aza-CdR)處理組的基因高甲基化,經10-6mol／L5-Aza-CdR處理72小時后,E-cadherin基因啟動子區(qū)域高甲基化得到逆轉；(3)蛋白質印跡法(Western blot)顯示經過藥物處理72H的腎癌細胞株Caki-1較未經處理的對照組的E-cadherin蛋白表達增強.
　　 結論:5-Aza-CdR