E-cadherin基因啟動(dòng)子甲基化及甲基化結(jié)合蛋白MeCP-,2-的研究.pdf

1、目的:
　　 1、檢測(cè)卵巢癌患者組織及血漿中E-鈣粘素(E-cadherin)基因啟動(dòng)子異常甲基化狀況,研究?jī)烧呦嚓P(guān)性,并探討兩者與臨床病理特征的關(guān)系。
　　 2、檢測(cè)惡性、交界性、良性卵巢腫瘤組織及正常卵巢組織中E-cadherin蛋白表達(dá)情況,分析E-鈣粘素基因啟動(dòng)子甲基化與蛋白表達(dá)的關(guān)系。
　　 3、檢測(cè)惡性、交界性、良性卵巢腫瘤組織及正常卵巢組織中甲基化CpG結(jié)合蛋白MeCP2表達(dá)情況,研究其對(duì)E-cad

2、蛋白表達(dá)的影響、與基因啟動(dòng)子甲基化的關(guān)系以及與臨床病理特征相關(guān)性。
　　 方法:
　　 1、采用巢式甲基化特異性PCR(nestedmethylationspecific-PCR,nMSP)技術(shù)結(jié)合單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析(SSCP)和DNA測(cè)序?qū)ρ獫{、組織中E-cadherin基因啟動(dòng)子甲基化情況進(jìn)行分析。
　　 2、利用免疫組化Sp法檢測(cè)E-cadherin在各組卵巢組織中的表達(dá)狀況。
　　 3、應(yīng)用原位雜

3、交技術(shù)檢測(cè)各組卵巢組織中甲基化結(jié)合蛋MeCP2的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:
　　 1、上皮性卵巢癌患者血漿和組織中E-cadherin基因甲基化的檢出率分別為66.0％(31/47)和70.2％(33/47),均明顯高于其他各組。血漿E-cadherin基因啟動(dòng)子甲基化狀況與組織密切相關(guān)(r=0.457,P<0.05),兩者甲基化總體符合率78.7％(37/47)。
　　 2、上皮性卵巢腫瘤患者血漿和組織中E-ca

4、dherin基因的甲基化檢出率在病理分級(jí)中高分化組明顯高于低分化組(t=14.805,P<0.05；t=4.215,P<0.05)；上皮性卵巢癌中晚期患者血漿與組織E-cad啟動(dòng)子甲基化檢出率均明顯高于早期(t=10.900,P<0.05；t=9.323,P<0.05)；腹腔沖洗液或腹水細(xì)胞學(xué)陽(yáng)性、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組E-cad的表達(dá)水平均高于陰性和無轉(zhuǎn)移組,差異均據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 3、正常卵巢表面上皮無E-cad表

5、達(dá)；惡性和交界性組織E-cad表達(dá)均低于良性組(t=1.81,P=0.001；t=:1.36,P=0.043)；在卵巢低分化腺癌中E-cad的表達(dá)水平低于其他類型；E-cad的表達(dá)與病理分級(jí)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.705,P<0.05)；早期卵巢癌中E-cad的表達(dá)水平高于中晚期卵巢癌(t=2.456,P<0.05)；腹腔沖洗液或腹水細(xì)胞學(xué)陰性、淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移組E-cad的表達(dá)水平均高于陽(yáng)性和轉(zhuǎn)移組,但差異尚無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

6、r>　　 4、在正常卵巢、良性、交界性及惡性卵巢上皮組織中均有MeCP2的表達(dá)。惡性組的表達(dá)水平顯著高于良性組、正常組(t=-1.79,P<0.05:t=2.05,P<0.05),但與交界組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.08,P>0.05)；MeCP2在卵巢粘液性腺癌中的表達(dá)明顯高于其他類型(F=2.754,P<0.05)；低分化癌與中高分化癌相比MeCP2的表達(dá)明顯升高且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=5.201,P<0.05)；中晚期卵巢癌Me

7、CP2的表達(dá)高于早期(t=3.438；P<0.05)；腹腔沖洗液或腹水細(xì)胞學(xué)陽(yáng)性、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者M(jìn)eCP2的表達(dá)均高于陰性、無轉(zhuǎn)移組,但差異尚無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.018,P>0.05；t=0.752,P>0.05)。
　　 5、E-cad啟動(dòng)子甲基化組E-cad蛋白表達(dá)水平低于非甲基化組(t=8.66,P<0.05),E-cad啟動(dòng)子甲基化與E-cad的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=0.386,P<0.05)；上皮性卵巢癌中MeCP2蛋白表

8、達(dá)與E-cad的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=0.312,P<0.05)；E-cad啟動(dòng)子甲基化與MeCP2的表達(dá)無相關(guān)關(guān)系。
　　 6、用Kaplan-Merier方法進(jìn)行無瘤生存期分析,結(jié)果顯示E-cad的表達(dá)與無瘤生存率無明顯相關(guān)性(Long-rank檢驗(yàn)值為0.540,P值>0.05),但E-cad啟動(dòng)子非甲基化組、MeCP2陰性+弱陽(yáng)性組的無瘤生存期均明顯長(zhǎng)于甲基化組和MeCP2強(qiáng)陽(yáng)性組(Long-rank檢驗(yàn)值分別為3.839、

9、4.803,P<0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、E-cad在上皮性卵巢腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中被誘導(dǎo)表達(dá),惡性及交界性上皮性卵巢癌中E-cad啟動(dòng)子甲基化的檢出率高于正常及良性組,且與卵巢癌病理特征相關(guān),是卵巢癌發(fā)生發(fā)展過程中的重要事件。
　　 2、E-cad蛋白在晚期低分化卵巢癌中的表達(dá)明顯低于早期高分化卵巢癌,提示在卵巢癌的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移中起重要作用,可作為判斷卵巢癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的重要指標(biāo)。
　　 3

10、、血漿中E-cad啟動(dòng)子甲基化狀況與相應(yīng)卵巢癌組織中有很好的對(duì)應(yīng)關(guān)系,且與患者的病理分級(jí)和臨床期別密切相關(guān),有望成為一種新型、簡(jiǎn)便、無創(chuàng)的生物標(biāo)記物應(yīng)用于臨床。
　　 4、MeCP2在上皮性卵巢癌中的表達(dá)明顯高于正常和良性組,在晚期低分化上皮性卵巢癌中的表達(dá)顯著高于早期高分化上皮性卵巢癌,提示MeCP2基因的表達(dá)與上皮性卵巢癌的惡性程度有關(guān),有可能成為檢測(cè)上皮性卵巢癌臨床病情進(jìn)展及預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)記。
　　 5、在上皮性卵