冠心病與血漿血栓調節(jié)蛋白基因啟動子甲基化關系的初步研究.pdf

1、背景：血栓調節(jié)蛋白（thrombomodulin，TM）是近年來新發(fā)現(xiàn)的存在于血管內皮細胞表面的糖蛋白，作為凝血酶的受體，它參與蛋白C（PC）的活化，在抗凝過程中發(fā)揮重要作用，此外，它還能降解纖溶酶原激活物抑制物（PAI），促進纖溶。內皮功能受損是動脈粥樣硬化的始動因素，內皮細胞的抗凝功能改變可導致抗凝/纖溶平衡失調。TM 通過結合凝血酶，可以對抗由其損傷內皮引起的促動脈粥樣硬化（AS）作用。因此，作為內皮細胞的保護因子之一，且具有抗血

2、栓形成功能的TM 在AS 中的作用令人關注。研究發(fā)現(xiàn)，冠狀動脈粥樣硬化患者血漿中TM 濃度顯著高于對照組，表明TM 的表達調控在其參與動脈粥樣硬化病理生理作用的機制中有重要意義。 近年來，AS 的表遺傳學研究逐漸成為熱點，甲基化作為一種主要的表遺傳學修飾，是最常見的復制后及轉錄前修飾方式之一，在基因表達調控、發(fā)育調節(jié)、基因組印跡等方面發(fā)揮重要作用。許多研究證明，動脈粥樣硬化與特異基因的異常甲基化有關，與動脈粥樣硬化密切相關的TM

3、 基因其啟動子區(qū)甲基化程度在病理情況下顯著升高。因此對體內TM 基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)在冠狀動脈粥樣硬化性心臟病中的研究及對其表達調控機理的探討，將有助于進一步探討動脈粥樣硬化的發(fā)病機理，從而為冠心病的預防和治療提供理論依據(jù)。 目的：（1）檢測冠心病患者血漿TM 基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)并與正常人對比，觀察人TM 基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)是否與動脈粥樣硬化的發(fā)生相關；（2）檢測研究對象的血漿TM 濃度，通過觀察血漿TM 濃度與人TM

4、 基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)的關系，探討TM 基因表達的調控機理。（3）通過觀察血漿TM 濃度與冠心病發(fā)生的關系，進一步推測TM 基因參與動脈粥樣硬化發(fā)生的機理。 方法：（1）隨機選取90 例經冠狀動脈造影（CAG）證實狹窄或有粥樣斑塊的患者，和75 例經CAG 證實無狹窄的對照組，采用甲基化特異性PCR(MS-PCR)檢測兩組血漿TM 基因啟動子區(qū)甲基化狀況。（2）ELISA 法檢測兩組血漿TM 濃度，結果進行統(tǒng)計學分析。

5、 結果：（1）MS-PCR 檢測發(fā)現(xiàn)，冠心病患者90 例，甲基化檢出率為41％（37/90）；對照組60 例，甲基化檢出率20％（17/75），冠心病組TM 基因啟動子甲基化檢出率顯著高于對照組（P＜0.05）。 （2）性別與TM 基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)關系分析：冠心病組男性患者76 例，甲基化檢出率為43％（33/76），對照組男性患者43 例，甲基化檢出率為19％（8/43），兩者比較冠心病組男性患者甲基化檢出率明顯高于對照

6、組（P＜0.05）；冠心病組女性患者14 例，甲基化檢出率為29％（4/14），對照組女性患者32 例，甲基化檢出率為22％（7/32），兩者比較無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。 （3）動脈粥樣硬化不同血管病變程度與TM 基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)關系分析：1 支血管病變組甲基化檢出率為44％（11/25），2 支血管病變組檢出率為39％（9/23），3支血管病變組甲基化檢出率為40％（17/42），3 組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0

7、.05）。因此，TM 基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)與血管病變程度無關。 （4）按年齡將所有對象分為4 組，49 歲以下組31 例，甲基化檢出率19.35％；50～59 歲組48 例，甲基化檢出率29.17％；60～69 歲51 例，甲基化檢出率33.33％； 70 歲以上組35 例，甲基化檢出率42.86％。隨年齡的增加，TM 基因啟動子區(qū)甲基化檢出率有上升的趨勢，但4 組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。 （5）冠心病組

8、血漿TM 濃度為(0.70±0.24)ng/ml，對照組為(0.52±0.18)ng/ml，冠心病組高于對照組，兩者比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 （6）性別與血漿TM 濃度關系的分析：冠心病組男性患者35 例，血漿平均TM 濃度為7.0±2.4ng/ml，對照組男性26 例，血漿平均TM 濃度為5.2±1.8ng/ml，兩者比較差異有統(tǒng)計學意義，冠心病組男性血漿平均TM 濃度顯著高于對照組（P＜0.05）；冠心病組女性

9、患者6 例，血漿平均TM 濃度為6.1±2.4ng/ml，對照組女性15 例，血漿平均TM 濃度為5.6±2.2ng/ml，兩者比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。 結論：（1）165 例研究對象中，冠心病組的TM 基因啟動子區(qū)甲基化檢出率明顯高于對照組，由此推測外周血TM 基因啟動子區(qū)的高甲基化狀態(tài)，與冠心病的發(fā)生密切相關。它抑制或下調TM 的表達，使其失去對抗由其損傷內皮引起的促動脈粥樣硬化（AS）作用，產生促動脈粥樣硬化

10、作用。（2）冠心病組男性TM 基因啟動子區(qū)甲基化檢出率顯著高于對照組，而女性未發(fā)現(xiàn)此現(xiàn)象，提示外周血TM 基因高甲基化狀態(tài)在男性易患AS 中發(fā)揮重要作用，其機制可能與雄性激素相關，但需進一步研究證實。（3）90 例冠心病患者中，未觀察到TM 基因啟動子區(qū)的甲基化狀態(tài)隨病變程度的增加有增高的趨勢，這提示外周血TM 基因的高甲基化狀態(tài)參與啟動動脈粥樣硬化，之后TM 甲基化呈維持狀態(tài)。（4）冠心病組血漿TM 濃度顯著高于對照組，提示血細胞生成