E-cadherin啟動子甲基化在低氧誘導腎小管上皮細胞轉分化中的作用研究.pdf

1、目的:
　　 觀察低氧誘導的人近端腎小管上皮細胞株(HKC)轉分化(EMT)過程中甲基化轉移酶1(Dnmt1)水平的變化，及E-鈣黏蛋白(E-cadherin)啟動子區(qū)DNA甲基化狀態(tài)，同時觀察甲基化轉移酶抑制劑5-aza-2'-deoxycytidine(5-aza-dC)和去乙酰化酶抑制劑Trichostatin A(TSA)對低氧誘導的HKC細胞EMT進程的影響并探討其可能機制。
　　 方法:
　　 低氧培

2、養(yǎng)HKC細胞，采用RT-PCR和Western blot分別檢測Dnmt1 mRNA和蛋白表達，甲基化特異性PCR(MSP)檢測E-cadhein啟動子區(qū)基因甲基化狀態(tài)，Western blot檢測e-cadherin,vimentin蛋白表達，細胞免疫熒光檢測e-cadherin,vimentin蛋白分布。HKC加入5-aza-dC或TSA預處理后于低氧培養(yǎng)，檢測上述各指標。
　　 結果:
　　 低氧誘導HKC轉分化的

3、模型中，HKC細胞Dnmt1 mRNA和蛋白表達顯著增加,E-cadherin啟動子區(qū)甲基化呈超甲基化狀態(tài)。用甲基化轉移酶抑制劑5-aza-dC預處理后則可以部分抑制低氧刺激引起的EMT及Dnmt1表達上調，而用去乙酰化酶抑制劑TSA預處理也可部分抑制低氧刺激引起的EMT，但對Dnmt1的表達沒有顯著影響。
　　 結論：
　　 E-cadherin啟動子超甲基化有可能在低氧刺激誘導的HKC細胞EMT中起關鍵作用，而甲基化