七氟醚、異氟醚對(duì)骨肉瘤MG63細(xì)胞增殖、凋亡及化療敏感性的影響.pdf

1、過(guò)去的幾十年中麻醉專業(yè)已經(jīng)把它的臨床實(shí)踐從大部分局限在手術(shù)室擴(kuò)展到包括“急性疼痛治療”、“術(shù)后監(jiān)護(hù)治療”、“重癥監(jiān)護(hù)治療”、“慢性疼痛治療”、“睡眠治療”和“姑息治療”在內(nèi)的圍術(shù)期醫(yī)療范疇。最近麻醉學(xué)雜志上有一篇文章討論將“圍術(shù)期醫(yī)學(xué)”加到“麻醉科”的名稱中并決定如何擴(kuò)展最新的培訓(xùn)課程[1]。“麻醉科”更名為“麻醉及圍術(shù)期醫(yī)學(xué)科”已達(dá)成專家共識(shí)。而在中國(guó)劉進(jìn)也提出了“改善圍術(shù)期患者的轉(zhuǎn)歸是麻醉醫(yī)生始終不渝的使命”。麻醉藥物及方法的選擇對(duì)

2、患者術(shù)后的轉(zhuǎn)歸有重要影響。腫瘤手術(shù)患者術(shù)中都需要接觸到麻醉藥物。麻醉藥物對(duì)腫瘤的生物學(xué)特性影響最近越來(lái)越受到關(guān)注。最近有研究表明異氟醚可促進(jìn)卵巢癌的增殖[2]，同時(shí)異氟醚還可促進(jìn)前列腺癌的增殖、遷移及化療耐藥[3]。2013年麻醉學(xué)雜志上發(fā)表的異氟醚促進(jìn)腎細(xì)胞癌的增殖及遷移受到了廣泛的關(guān)注及討論[4]。而之前的研究表明常用吸入麻醉藥如氟烷、七氟醚及異氟醚對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖有抑制作用，且與處理時(shí)間密切相關(guān)[5]。以上結(jié)論的差異可能是由于吸入麻

3、醉藥處理的時(shí)間及與腫瘤細(xì)胞種類的不同導(dǎo)致。又有研究顯示七氟醚可拮抗順鉑對(duì)艾氏腹水細(xì)胞瘤的DNA毒性。骨肉瘤是一種高致殘率的惡性腫瘤。其手術(shù)常用麻醉藥物為七氟醚和異氟醚。而七氟醚、異氟醚對(duì)骨肉瘤生物學(xué)特性及化療敏感性的影響并未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。
　　本課題將應(yīng)用腫瘤生物學(xué)常用實(shí)驗(yàn)技術(shù)及分子生物學(xué)常用實(shí)驗(yàn)方法對(duì)吸入麻醉藥對(duì)骨肉瘤MG63細(xì)胞增殖凋亡及對(duì)順鉑化療敏感性的影響進(jìn)行研究，并檢測(cè)相關(guān)蛋白分子水平的變化，探討可能的相關(guān)機(jī)制。
　

4、　實(shí)驗(yàn)一七氟醚、異氟醚對(duì)骨肉瘤MG63細(xì)胞增殖、克隆形成及凋亡的影響
　　目的：
　　觀察不同濃度七氟醚、異氟醚對(duì)骨肉瘤 MG63細(xì)胞增殖、克隆形成能力及凋亡的影響。
　　方法：
　　將MG63細(xì)胞從液氮中取出，迅速放入37℃水浴鍋中，復(fù)蘇細(xì)胞，常規(guī)培養(yǎng)細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)分七組：對(duì)照組（C組）：充入含5％CO2、21%O2、74%N2混合氣體，處理4 h，七氟醚組（S1組）：1.7%七氟醚的上述混合氣體處理4 h，七氟醚

5、組（S2組）：3.4%七氟醚的混合氣體處理4 h，七氟醚組（S3組）：5.1%七氟醚的混合氣體處理4 h，異氟醚組（I1組）：充入含有1.3%異氟醚的混合氣體處理4 h，異氟醚組（I2組）：2.0%異氟醚混合氣體處理4 h，異氟醚組（I3組）：2.6%異氟醚混合氣體處理4 h。用MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖抑制率，平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞的克隆形成能力，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞的凋亡率。
　　結(jié)果：
　　1．MTT法檢測(cè)顯

6、示:與對(duì)照組相比，七氟醚、異氟醚處理組增殖抑制率增高（P<0.05），其中 S3組和I3組增殖抑制率高于其它各組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示七氟醚、異氟醚對(duì)骨肉瘤MG63細(xì)胞增殖有抑制作用，其中高濃度的吸入麻醉藥抑制作用更明顯。
　　2．平板克隆形成實(shí)驗(yàn)：與對(duì)照組相比，各濃度七氟醚、異氟醚組克隆形成率要低于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但組間比較顯示各濃度七氟醚組和異氟醚組無(wú)差異。提示七氟醚、異氟醚對(duì)骨

7、肉瘤 MG63細(xì)胞克隆形成有抑制作用，但與濃度關(guān)系不大。
　　3．流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果：與對(duì)照組相比，各濃度七氟醚、異氟醚組細(xì)胞凋亡率無(wú)差異（P>0.05），組間多重比較顯示，各組間細(xì)胞凋亡率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。提示各濃度七氟醚、異氟醚并不促進(jìn)骨肉瘤MG63細(xì)胞的凋亡。
　　結(jié)論：
　　七氟醚、異氟醚對(duì)骨肉瘤MG63細(xì)胞增殖有抑制作用，高濃度抑制作用更明顯；七氟醚、異氟醚對(duì)骨肉瘤MG63細(xì)胞克隆形成能力有抑制作用，

8、但與濃度關(guān)系不大；七氟醚、異氟醚對(duì)骨肉瘤MG63細(xì)胞凋亡無(wú)影響，提示七氟醚、異氟醚對(duì)MG63細(xì)胞增殖抑制作用與凋亡無(wú)關(guān)。
　　實(shí)驗(yàn)二七氟醚、異氟醚對(duì)順鉑誘導(dǎo)的骨肉瘤MG63細(xì)胞凋亡的影響及相關(guān)機(jī)制
　　目的：
　　觀察2.5%七氟醚、2.0%異氟醚對(duì)順鉑誘導(dǎo)的MG63細(xì)胞凋亡率的影響。
　　方法：
　　同實(shí)驗(yàn)一。實(shí)驗(yàn)分為六組：對(duì)照組，只充入含5% CO2、21%O2、74%N2混合氣體，處理4 h；七氟醚組

9、，含2.5%七氟醚的混合氣體處理4h；異氟醚組，含2.0%異氟醚的混合氣體處理MG63細(xì)胞4h；順鉑組：用終濃度為10mg/L的順鉑處理MG63細(xì)胞24h；順鉑+七氟醚組，加入終濃度為10mg/L的順鉑處理24h另于開(kāi)始4h內(nèi)同時(shí)給予2.5%七氟醚處理；順鉑組+異氟醚，加入終濃度為10mg/L的順鉑處理24h另于開(kāi)始4h內(nèi)同時(shí)給予2.0%異氟醚處理。
　　MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞活力，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率，Western bl

10、ot檢測(cè)各組細(xì)胞p-Akt、NF-κB P65、Hif-1α、Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1. MTT法結(jié)果：與對(duì)照組相比，各組細(xì)胞吸光度值降低（P<0.05），其中順鉑組、順鉑+七氟醚組、順鉑+異氟醚吸光度值明顯低于其它各組（P<0.05），提示七氟醚、異氟醚、順鉑對(duì)MG63細(xì)胞活力有影響，順鉑對(duì)其活力影響更明顯；與順鉑組相比，順鉑+七氟醚組、順鉑+異氟醚吸光度值高于單純順鉑組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

11、<0.05），提示七氟醚、異氟醚對(duì)順鉑對(duì)骨肉瘤MG63細(xì)胞毒性作用有拮抗作用。
　　2.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，順鉑組、順鉑+七氟醚組、順鉑+異氟醚組細(xì)胞凋亡率明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示順鉑誘導(dǎo)了骨肉瘤MG63細(xì)胞凋亡；與順鉑比相比，順鉑+七氟醚組、順鉑+異氟醚細(xì)胞凋亡率降低于（P<0.05），提示七氟醚、異氟醚對(duì)順鉑誘導(dǎo)MG63細(xì)胞凋亡有拮抗作用。
　　3. Western blot結(jié)

12、果顯示：與順鉑組相比，順鉑+七氟醚組、順鉑+異氟醚組NF-κB P65、Hif-1α、Bcl-2表達(dá)升高，Bax表達(dá)減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示七氟醚、異氟醚促進(jìn)了NF-κB的活化，提高了Hif-1α表達(dá)水平，并改變了凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax的表達(dá)，七氟醚、異氟醚對(duì)骨肉瘤MG63對(duì)順鉑化療敏感性的影響可能與這些蛋白表達(dá)變化有關(guān)。p-Akt蛋白表達(dá)在各組間并無(wú)差異（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　七氟