抗氧化劑二巰代氨基甲酸吡咯烷對骨肉瘤MG63細胞增殖和凋亡的影響的研究.pdf

1、目的：
　　 骨肉瘤是最常見的原發(fā)性間葉組織惡性骨腫瘤,好發(fā)于青少年,惡性程度高,預后較差,5年生存率僅有20％。目前雖在術前術后給予化療后生存率有所提高,但對于化療耐受和轉移復發(fā)的病例,化療或手術常難以奏效.
　　 除了傳統(tǒng)的手術治療、化療外,骨肉瘤的綜合治療特別是基因治療為骨肉瘤的治療取得了新的進展。IAP家族因在凋亡抵抗中可能起重要作用而日益受到重視,Livin是這個家族中的新成員,主要在腫瘤細胞中高表達,其表達水

2、平的增高可導致細胞抗凋亡能力的增強。因此抑制Livin在骨肉瘤細胞中的表達,恢復骨肉瘤細胞對凋亡的敏感性,可能會提高骨肉瘤臨床治療效果。
　　 現(xiàn)在發(fā)現(xiàn),抗氧化劑二巰代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)可下調IAP家族中CIAP1和CIAP2等分子的表達,促進細胞凋亡,但目前它與Livin表達之間的關系尚不清楚.本研究觀察了在NF-kB抑制劑PDTC誘導骨肉瘤細胞發(fā)生凋亡的過程中,Livin和caspase-3表達水平的變化,探討PDT

3、C在促凋亡途徑中可能發(fā)揮的作用。
　　 方 法
　　 以不同濃度(0、50、100、200、400μmol/L)PDTC作用于骨肉瘤MG63細胞不同時間(24h,48h)后,(1)采用MTT法測定其PDTC對MG63細胞的抑制率；(2)采用流式細胞儀測定MG63細胞的凋亡情況；(3)采用RT-PCR和Western-blot法檢測MG63細胞Livin和caspase-3的mRNA和蛋白的表達情況。
　　 結 果

4、
　　 1、不同濃度PDTC作用24h,48h后對MG63細胞生長有明顯抑制作用,并呈時間、劑量依賴性。
　　 2、流式細胞儀的結果顯示,50、100、200和400μmol/LPDTC作用48h后的凋亡率分別6.78±1.07％,14.45±1.56％,20.23±1.02％,28.65±1.87％為與對照組2.80±0.35％相比,差異有顯著性,且各濃度組之間差異均有顯著性(p<0.01),100μmol/LPDTC

5、作用24、48 h后的凋亡率分別為10.04±1.07％,14.45±1.56％與對照組2.80±0.15％相比,差異有顯著性,且各時間組之間差異也均有顯著性(p<0.01)。
　　 3、RT-PCR和Westem-blot法分析顯示,PDTC作用于MG63細胞后可降低Livin的mRNA和蛋白的表達,增加caspase-3的mRNA和蛋白的表達,呈現(xiàn)劑量依賴性。且Livin的表達與PDTC的作用以及骨肉瘤細胞凋亡率呈劑量負相關

6、,與caspase-3的表達也呈劑量負相關。
　　 結 論
　　 1、PDTC可明顯抑制人骨肉瘤MG63細胞,并使細胞周期受到阻滯,進一步誘導腫瘤細胞凋亡,從而發(fā)揮抗腫瘤作用。抑制細胞與誘導凋亡呈劑量依賴關系。
　　 2、從Western-blotting的結果得出PDTC可使Livin表達水平降低,并使caspase-3表達水平增加。表明PDTC在促進凋亡中具有重要作用。
　　 3、在誘導MG63細胞凋