鏈脲佐菌素誘導糖尿病小鼠神經(jīng)細胞的凋亡對抑郁癥狀的影響.pdf

1、背景與目的：
　　重度抑郁癥（Major depression disorder，MDD）或抑郁普遍存在于糖尿病患者中。與MDD患者相比較，合并糖尿病者其抑郁的癥狀表現(xiàn)更為嚴重，且對抗抑郁藥的治療效果更差。到目前為止，對這一機制的研究仍較少。我們假設抑郁合并糖尿病的病理生理學機制比MDD更為復雜，而神經(jīng)細胞的凋亡在這一疾病的發(fā)生及嚴重程度上發(fā)揮了重要的作用。本實驗探索糖尿病伴發(fā)抑郁的可能機制，旨在為臨床上糖尿病合并抑郁的預防和治療

2、提供借鑒和幫助。通過分子水平干預糖尿病后抑郁的發(fā)生，提高糖尿病患者的生活質(zhì)量。材料與方法
　　選取雄性昆明小鼠20只（8周齡，38.50±1.51g），其中實驗組及對照組各10只，實驗組經(jīng)腹腔注射鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ）200mg/kg制備糖尿病小鼠模型，對照組注射同等劑量檸檬酸緩沖液。動態(tài)觀察注射藥物后8周內(nèi)兩組小鼠體重及血糖變化，隨機抽取一天記錄兩組小鼠進食飼料量及飲水量。第8周時通過動物行為實驗（曠

3、場實驗、強迫游泳實驗及懸尾實驗）評價小鼠抑郁水平。行為實驗結(jié)束后處死動物，留取相關標本，通過Elisa檢測血清BDNF水平、q-PCR檢測海馬及前皮層Fis1、Drp1、Mfn1、Mfn2、Opa1 mRNA水平、Western blot檢測Drp1及Mfn2蛋白水平、IF進行大腦海馬及前皮層TUNNEL及DAPI染色。應用Spearman’s rank test分析行為實驗與海馬及前皮層細胞凋亡的相關性。實驗結(jié)果應用T-test統(tǒng)計學

4、方法進行分析，P<0.05有統(tǒng)計學差異，P<0.01有顯著統(tǒng)計學差異。
　　結(jié)果：
　　1.實驗組小鼠注射STZ后血糖水平升高，達到糖尿病標準，對照組血糖維持在正常水平，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；實驗組體重于注射STZ第8天后開始下降，并維持一定水平，對照組體重隨周齡遞增，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；隨機取注藥后一天，測得實驗組小鼠飼料進食量級飲水量較對照組明顯增加，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P

5、<0.05）。
　　2.動物行為實驗:在曠場實驗中，兩組小鼠在5分鐘內(nèi)運動總距離比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；實驗組通過中央?yún)^(qū)域的距離較對照組明顯減少，通過中央?yún)^(qū)域距離/周圍區(qū)域距離及停留在中央?yún)^(qū)域時間/周圍區(qū)域時間較對照組明顯減少，兩組對比有顯著統(tǒng)計學差異（P<0.01）；實驗組站立次數(shù)較對照組減少，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。在強迫游泳實驗及懸尾試驗中，實驗組不動時間較對照組均明顯增加，兩組比較差異有統(tǒng)計

6、學意義（P<0.05）。
　　3.應用IF進行大腦海馬及前皮層TUNNEL及DAPI染色，實驗組在以上兩個區(qū)域內(nèi)神經(jīng)細胞凋亡率較對照組明顯增多，兩組對比有顯著統(tǒng)計學差異（P<0.01）。
　　4.應用Elisa檢測兩組血清BDNF水平，實驗組血清BDNF水平較對照組降低，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　5.應用q-PCR檢測海馬及前皮層Fis1、Drp1、Mfn1、Mfn2、Opa1 mRNA水平，實驗

7、組Fis1、Drp1 mRNA水平較對照組升高，Mfn1、Mfn2、Opa1 mRNA水平較對照組降低，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　6.應用Western blot檢測海馬及前皮層Drp1及Mfn2蛋白水平，實驗組以上兩個區(qū)域Drp1蛋白水平較對照組均明顯升高，Mfn2蛋白水平較對照組降低，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　7. Spearman’s rank test分析，除海馬Bcl-2

8、、前皮層Caspase-3及Bcl-2蛋白水平與曠場實驗組動物站立次數(shù)無相關性外，海馬及前皮層TUNNEL細胞凋亡率、Caspase-3及Bcl-2蛋白水平分別與行為實驗中各相關指標均有相關性（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　神經(jīng)細胞凋亡與糖尿病小鼠的抑郁癥狀相關聯(lián)，介導線粒體動力學改變的基因及蛋白水平的裂解顯性表達在高血糖誘導的細胞凋亡過程中發(fā)揮重要作用。本項研究為疾病的發(fā)生機制提供新的見解，且通過調(diào)節(jié)線粒體動力從而到達