鏈脲佐菌素誘導的1型糖尿病大鼠早期股骨BMP-2及其抑制因子Noggin表達的變化.pdf

1、目的：
　　建立1型糖尿病大鼠模型,測定血清骨代謝相關標志物、股骨BMD,探討股骨干骺端骨形態(tài)蛋白2(Bone Morphogenetic Protein2,BMP-2)及BMP-2抑制因子Noggin的mRNA及蛋白表達變化與1型糖尿病骨代謝紊亂的關系。
　　方法：
　　1.實驗分組與模型制作
　　6-8周Wistar雌性大鼠45只,體重180-220g,隨機分為1型糖尿病模型組(D組)和正常對照組(C組)。D

2、組大鼠一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)(60mg/kg),3天后隨機血糖＞16.7mmol/L者納入正式實驗;C組大鼠腹腔注射等量檸檬酸鹽緩沖液。C組和D組再根據取樣時間:造模成功后1w、2w、4w,分為C1w、C2w、C4w組和D1w、D2w、D4w共6組(n=6)。
　　2.標本采集
　　C組、D組大鼠于各取樣時間稱重后,腹腔注射1%氯胺酮(100mg/Kg)行全身麻醉。自下腔靜脈取血,3

3、000rpm離心10分鐘,留取上層血清,-20℃保存;迅速取出兩側股骨,仔細去除附著的肌肉及筋膜,右側股骨經液氮冷凍后,-80℃保存;左側股骨用生理鹽水浸泡的紗布包裹送檢。
　　3.指標檢測
　　(1)采用ELISA法檢測血清胰島素、PTH、CT、OC及BALP水平,微量血糖儀檢測血糖。
　　(2)實時熒光定量RT-PCR法檢測右側股骨干骺端BMP-2及NogginmRNA的表達,Western-blot法檢測BMP-

4、2、Noggin蛋白表達水平。
　　(3)雙能X線吸收法(Dual-energy X-ray absorptiometry,DEXA)測定左側股骨BMD。
　　結果：
　　1.一般情況:
　　D組大鼠體增長緩慢,低于同期同齡的C組大鼠(P＜0.05);D組大鼠血清胰島素水平明顯低于C組(P＜0.05)。
　　2.血清指標:
　　2w、4w時D組血清BALP水平明顯高于C組,差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.

5、05);1w、2w、4w時D組血清OC水平明顯低于C組,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　3.股骨干骺端BMP-2及Noggin m RNA表達:
　　4w時D組大鼠骨組織中BMP-2 mRNA表達水平降至C組的49%,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);4w時D組大鼠骨組織中Noggin mRNA表達水平升至C組的1.5倍,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　4.股骨干骺端BMP-2及Noggin蛋白表達:<

6、br>　　4w時D組大鼠股骨BMP-2蛋白水平下降至C組的64%,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);4w時D組大鼠骨組織中Noggin蛋白表達水平上升至C組的1.5倍,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　5.股骨BMD:
　　1w、2w時D組股骨BMD與C組相比有下降趨勢,但差異無統(tǒng)計學意義;4w時D組大鼠股骨總BMD明顯低于C組,差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　結論：
　　1型糖尿病早期大鼠股骨B