非小細(xì)胞肺癌CD44v6 mRNA表達(dá)及臨床意義.pdf

1、目的：肺癌是最常見的惡性腫瘤，在我國(guó)近幾年其發(fā)病率有逐漸上升的趨勢(shì)。在臨床上以其高轉(zhuǎn)移性和治療療效差為特征。因此對(duì)肺癌的發(fā)生與發(fā)展，侵襲與轉(zhuǎn)移的研究成為呼吸系統(tǒng)腫瘤的研究熱點(diǎn)。肺癌發(fā)生的分子生物學(xué)研究提示，肺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移是一個(gè)多步驟、多因素的改變過程，往往與多種癌基因、蛋白、酶的表達(dá)有關(guān)。CD44是一種分布極為廣泛的細(xì)胞表面跨膜糖蛋白，主要參與細(xì)胞、細(xì)胞基質(zhì)之間的特異性粘連過程，其變異體CD44v6與人類惡性腫瘤的發(fā)生與轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

2、然而迄今CD44v6在肺癌的原位檢測(cè)報(bào)道尚少。而人類肺癌中以非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的發(fā)生率最高，約占75～85％，早診率低且易出現(xiàn)早期轉(zhuǎn)移、治療后容易復(fù)發(fā)，其轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)機(jī)制仍不清楚。對(duì)CD44v6與非小細(xì)胞肺癌的關(guān)系，目前尚無定論。該研究的目的在于從基因轉(zhuǎn)錄水平上探討CD44v6mRNA在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其臨床意義。 材料與方法：臨床資料：56例非小細(xì)胞肺癌原位癌組織標(biāo)本，12例癌旁正常肺組織標(biāo)本，均經(jīng)病理證實(shí)。所有病人

3、均行一側(cè)全肺或肺葉切除手術(shù)，標(biāo)本于手術(shù)切除后30分鐘內(nèi)置于經(jīng)0.1％的二乙基焦磷酰胺(DEPC)水處理的Eppendorf管中，-80℃冰箱冷凍保存。 實(shí)驗(yàn)方法：RT-PCR(逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng))首先由CD44v6mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生cDNA單鏈，并以此單鏈為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。在對(duì)目的基因進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增的同時(shí)，在同一體系中加入內(nèi)參照基因(β-action)的引物一同擴(kuò)增，擴(kuò)增的內(nèi)參照基因可顯示整個(gè)RT-PCR體系的擴(kuò)增效果

4、。 實(shí)驗(yàn)過程：總RNA的提取和定量，取各部位組織標(biāo)本約100mg，移入組織勻漿器中，加入600ulGIT變性液，勻漿后吸取500ul至Eppendorf管中，輕輕催打至細(xì)胞裂解。再用氯紡、異丙醇、酒精等處理提取總RNA，在紫外分光光度計(jì)下檢測(cè)波長(zhǎng)在260和280時(shí)的吸光度值A(chǔ)260和A280。計(jì)算提取物濃度，判定純度，用RNA變性電泳檢測(cè)其完整性。合成CD44v6mRNA上、下游引物，進(jìn)行RT-PCR。產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳，電泳

5、后經(jīng)凝膠成像分析系統(tǒng)攝影，用相應(yīng)軟件掃描PCR產(chǎn)物溴乙錠染色后強(qiáng)度。 結(jié)果： 1、CD44v6mRNA在非小細(xì)胞肺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為75％(42/56)，而在癌旁正常肺組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為16.7％(2/12)。二者比較，具有極顯著性差異(x2=14.7247，P=0.0001)。 2、CD44v6mRNA在非小細(xì)胞肺癌男性患者的陽(yáng)性表達(dá)率為79％(30/38)，女性患者陽(yáng)性表達(dá)率為67％(12/18)，二者

6、比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(x2=0.9825，P=0.3216)。 3、CD44v6mRNA在非小細(xì)胞肺癌年齡大于等于60歲患者中的陽(yáng)性表達(dá)率為76.9％(20/26)，小于60歲患者的陽(yáng)性表達(dá)率為73.3％(22/30)，二者比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(x2=0.095，P=0.7570)。 4、非小細(xì)胞肺癌患者癌組織CD44v6mRNA陽(yáng)性表達(dá)率在腺癌中為73％(16/22)鱗癌75％(18/24)，其它類型癌80％(8/10

7、)。三者比較無顯著性差異(x21-2=0.0307,P1-2=0.8608，x21-3=0.1939,P1-3=0.659，x22-3=0.0981，P2-3=0.7541)5、非小細(xì)胞肺癌癌組織CD44v6mRNA在組織分化程度高分化、中分化、低分化各組中陽(yáng)性表達(dá)率分別為80％(16/20)，73％(16/22)，71％(10/14)。三組比較，統(tǒng)計(jì)學(xué)無顯著性差異。 (x21-2=0.3055，P1-2=0.5805，x21-

8、3=0.3367，P1-3=0.5620，x22-3=0.0072，P2-3=0.9324)。 6、非小細(xì)胞肺癌癌CD44v6mRNA陽(yáng)性表達(dá)率在PTNM分期Ⅰ+Ⅱ期為62％(18/29),Ⅲ+Ⅳ期為89％(24/27)，二者比較，差異有顯著性。 (x2=5.3640，P=0.0206)Ⅲ+Ⅳ期CD44v6mRNA陽(yáng)性表達(dá)率高于Ⅰ+Ⅱ期。7、非小細(xì)胞肺癌癌組織CD44v6mRNA陽(yáng)性表達(dá)率，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組90％(26/

9、29)，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組59％(16/27)。二者比較，具有顯著性差異。(x2=6.8897，P=0.0087)CD44v6mRNA陽(yáng)性表達(dá)率有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。 結(jié)論： 1、非小細(xì)胞肺癌癌組織CD44v6mRNA陽(yáng)性表達(dá)率與患者年齡、性別、病理類型及組織分化程度無明顯關(guān)系。 2、CD44v6mRNA在非小細(xì)胞肺癌原位癌組織陽(yáng)性表達(dá)率75％，而癌旁正常肺組織陽(yáng)性表達(dá)率16.7％，提示CD44v6可