基于核酸探針檢測(cè)四環(huán)素和卡那霉素的應(yīng)用研究.pdf

1、近年來(lái)，隨著抗生素作為基本藥物產(chǎn)用量不斷盲目擴(kuò)張，特別是運(yùn)用最廣泛的四環(huán)素類、氨基糖苷類和青霉素類過(guò)快、過(guò)度的不合理應(yīng)用，抗生素污染問(wèn)題日益嚴(yán)重，成為環(huán)境安全領(lǐng)域的重要研究熱點(diǎn)之一?？股貙?duì)環(huán)境有持久性的毒害作用，在自然條件下很難徹底降解成無(wú)毒的形式，由抗生素在環(huán)境各生態(tài)系統(tǒng)中的富集、遷移及轉(zhuǎn)化途徑帶來(lái)的潛在負(fù)面效應(yīng)，對(duì)環(huán)境及人類健康造成嚴(yán)重的威脅，引起整個(gè)社會(huì)的極大關(guān)注。傳統(tǒng)的抗生素殘留分析方法大多是微生物法和儀器分析法，需要大型儀器

2、，成本較高，或者檢測(cè)步驟繁瑣，難以滿足實(shí)時(shí)檢測(cè)的要求。因此，為應(yīng)對(duì)全球性抗生素污染的現(xiàn)狀，開發(fā)簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確的抗生素檢測(cè)方法愈發(fā)重要。核酸適配體具有高親和力、高穩(wěn)定性、高靈敏性等優(yōu)點(diǎn)，因此，在總結(jié)國(guó)內(nèi)外多年有關(guān)抗生素殘留分析的文獻(xiàn)基礎(chǔ)上，本論文建立了以核酸適配體特異性識(shí)別和納米金技術(shù)的互補(bǔ)結(jié)合為基礎(chǔ)，選擇四環(huán)素和卡那霉素作為研究的目標(biāo)分析物展開相關(guān)研究。
　　(1)基于核酸適配體-納米金探針比色和共振光散射測(cè)定四環(huán)素。核酸適配體

3、對(duì)目標(biāo)分子具有高親和力，能特異性結(jié)合蛋白質(zhì)、藥物、重金屬等，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)分子的檢測(cè)。合成了以四環(huán)素為靶物質(zhì)的核酸適配體(76 bp)，并將該序列用于構(gòu)建檢測(cè)四環(huán)素傳感體系。在適配體識(shí)別四環(huán)素的反應(yīng)中，納米金缺少核酸適配體保護(hù)膜，由于高濃度NaCl促使納米金粒子間距縮小而聚集，導(dǎo)致納米金溶膠顏色發(fā)生變化及共振光散射峰值在550 nm處大幅增加。結(jié)果顯示在最優(yōu)傳感體系中，即250μL納米金(AuNPs)、100μM NaCl、190μL3

4、-(N-嗎啉)丙磺酸(MOPS)緩沖液（10 mM，pH7.0），60 nM核酸適配體能在0～100μM范圍內(nèi)檢測(cè)四環(huán)素，比色與共振光散射法的最低檢測(cè)限分別為17.6 nM和24.2nM。
　　(2)基于陽(yáng)離子聚合物高效聚集納米金比色檢測(cè)卡那霉素。合成了卡那霉素素核酸適配子序列。將該序列用于構(gòu)建納米金-核酸適配子的四環(huán)素傳感體系，結(jié)果顯示在最優(yōu)傳感體系中，即100μL AuNPs、2.8μM PDDA、10 mM MOPS(pH7