川東獐牙菜（口山）酮的研究.pdf

1、川東獐牙菜(Swertia davidi Franch)系龍膽科(Gentianaceae)獐牙菜屬植物，為我國一種珍稀中草藥藥材，含有<口山>酮類、環(huán)烯醚萜類、三萜類和黃酮類等化學(xué)物質(zhì)，其中<口山>酮類是其重要有效部分之一。 本論文對(duì)川東獐牙菜中總<口山>酮的超臨界CO<,2>萃取分離工藝，超臨界CO<,2>萃取川東獐牙菜總<口山>酮指紋圖譜，主要成分去甲基雛菊葉龍膽酮和1，8-二羥基-3，7-二甲氧基<口山>酮制備新方法、結(jié)

2、構(gòu)確證，標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)，含量測定方法、去甲基雛菊葉龍膽酮代謝動(dòng)力學(xué)和激動(dòng)GLP-1受體作用進(jìn)行了研究，結(jié)果如下： 1、川東獐牙菜總<口山>酮萃取新工藝優(yōu)化。采用正交設(shè)計(jì)對(duì)超臨界CO<,2>萃取方法進(jìn)行工藝優(yōu)化，結(jié)果表明：超臨界CO<,2>萃取川東獐牙菜總<口山>酮的最佳條件是溫度40℃，壓力30MPa，夾帶劑為體積分?jǐn)?shù)95％乙醇(用量為1.2L/kg藥材)，萃取80min，總<口山>酮萃取率1.61％，該工藝與采用有機(jī)溶劑提取方法比

3、較，具有經(jīng)濟(jì)、環(huán)保、效率高和成本低的特點(diǎn)。 2、超臨界CO<,2>萃取川東獐牙菜總<口山>酮質(zhì)量控制研究 (1)、川東獐牙菜<口山>酮類成分標(biāo)準(zhǔn)品研究。 經(jīng)過反復(fù)研究，篩選出了硅膠G柱層析與微晶纖維素柱層析聯(lián)用進(jìn)行去甲基雛菊葉龍膽酮分離純化和硅膠G柱層析與制備薄層聯(lián)用進(jìn)行1，8-二羥基-3，7-二甲氧基<口山>酮的分離純化新方法，與已有文獻(xiàn)報(bào)道方法比較，該方法簡單、穩(wěn)定、重現(xiàn)性好，迄今為止尚無文獻(xiàn)報(bào)道；采用上述方

4、法分離純化獲得去甲基雛菊葉龍膽酮和1，8-二羥基-3，7-二甲氧基<口山>酮成分，HPLC法標(biāo)定純度分別不低于99.30％和99.0％；經(jīng)理化性質(zhì)分析和波譜(UV、IR、EI-MS、<'1>H-NMR、<'13>C-NMR、DEPT)解析，上述化合物分別鑒定為去甲基雛菊葉龍膽酮(demethylbellidifolin)和1，8-二羥基-3，7-二甲氧基<口山>酮(methylswertianin)；在此基礎(chǔ)上完成了去甲基雛菊葉龍膽酮和

5、1，8-二羥基-3，7-二甲氧基<口山>酮對(duì)照品制備與標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)的研究。 (2)、含量測定方法篩選。經(jīng)過反復(fù)試驗(yàn)，確定了高效液相色譜測定總<口山>酮中有效成分去甲基雛菊葉龍膽酮HPLC方法，其最佳色譜條件：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(Hypersil C18柱；150 mm×4.6 mm，5μm)，柱溫25℃，甲醇-0.5％磷酸水(56：44)為流動(dòng)相，流速1mL/min，254nm檢測；并進(jìn)行了相應(yīng)的方法學(xué)考察，穩(wěn)定性、重現(xiàn)

6、性和精密度RSD均小于3％，平均加樣回收率99.97％(RSD=0.94％)，去甲基雛菊葉龍膽酮在0.52～2.6μg(r=0.9994)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，其回歸方程為：Y=7.0×10<'6>X+408893。該方法準(zhǔn)確、簡便，可以應(yīng)用于川東獐牙菜藥材的含量測定，三批測定結(jié)果表明，川東獐牙菜藥材中去甲基雛菊葉龍膽酮含量0.752-0.770％。(3)、超臨界CO<,2>萃取川東獐牙菜總<口山>酮指紋圖譜研究。指紋圖譜是控制復(fù)雜體系藥

7、物的有效方法，經(jīng)過反復(fù)試驗(yàn)，篩選出了超臨界CO<,2>萃取川東獐牙菜總<口山>酮指紋圖譜測定最佳色譜條件：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(Hypersil C18柱；150 mm×4.6 mm，5μm)，柱溫20℃，甲醇-水(54：46)為流動(dòng)相，流速1.3 mL/min，檢測波長254 nm，方法學(xué)考察表明其穩(wěn)定性和重現(xiàn)性RSD小于3％，可應(yīng)用于川東獐牙菜總<口山>酮質(zhì)量控制；通過10批次川東獐牙菜總<口山>酮提取物指紋圖的測定，建立了

8、川東獐牙菜總<口山>酮指紋圖譜模式標(biāo)準(zhǔn)。 3、去甲基雛菊葉龍膽酮代謝動(dòng)力學(xué)。建立了測定血漿中去甲基雛菊葉龍膽酮濃度的高效液相色譜法，并用于川東獐牙菜中去甲基雛菊葉龍膽酮在小鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究。去甲基雛菊葉龍膽酮的線性范圍為0.048-4.8μg/ml(r=0.9996)，方法適用于測定去甲基雛菊葉龍膽酮在小鼠體內(nèi)的濃度。小鼠腹腔注射0.8g/kg的去甲基雛菊葉龍膽酮后其藥動(dòng)學(xué)參數(shù)為T<,1/2>α為(19.800±4.831)m

9、in，T<,1/2>β為(411.745±52.838)min，AUC為(92.246±10.906)mg·ml·min<'-1>，去甲基雛菊葉龍膽酮在小鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)符合二房室開放模型。 4、去甲基雛菊葉龍膽酮對(duì)GLP-1受體激動(dòng)作用。將GLP-1受體質(zhì)粒和報(bào)告基因質(zhì)粒以1：5的比例共轉(zhuǎn)染到已貼壁培養(yǎng)1 d的HEK293細(xì)胞中，通過G418篩選，建立穩(wěn)定的GLP-1受體細(xì)胞株。結(jié)果：去甲基雛菊葉龍膽酮能夠激動(dòng)GLP-1受體作用。