貴州獐牙菜抗糖尿病活性和物質(zhì)基礎研究.pdf

1、龍膽科(Gentianaceae)獐牙菜屬(Swertia)植物貴州獐牙菜(Swertia.kouitchensis)廣泛分布于湖北、貴州、四川東部及東南部、云南東北部、甘肅南部及陜西南部等地,植物資源非常豐富。為了充分利用該植物資源,本課題前期研究曾對貴州獐牙菜的化學成分及其抗HBV活性進行過研究。除此之外,國內(nèi)外鮮有關于貴州獐牙菜抗糖尿病活性及其化學成分的報道。所以,基于前期研究基礎,本課題以抗糖尿病活性作為指導,對貴州獐牙菜的化學

2、成分進行系統(tǒng)研究。
　　第一章貴州獐牙菜的抗糖尿病作用
　　為了提供貴州獐牙菜用于抗糖尿病治療的傳統(tǒng)用法提供現(xiàn)代藥理學研究根據(jù),本課題應用靶酶模型、細胞模型以及小鼠體內(nèi)模型來評價其抗糖尿病活性,并對其可能的作用機制進行探討。
　　首先運用α-淀粉酶(α-amylase)和α-葡萄糖苷酶(α-glucosidase)模型評價貴州獐牙菜對影響碳水化合物吸收的關鍵酶的作用,實驗表明該植物可以在體外顯著降低這兩種酶的活性。

3、r>　　而在小鼠胰腺腫瘤細胞(Mouseinsulinomacellline,NIT-1cells)模型中,我們通過考察貴州獐牙菜總提物對細胞的刺激作用,發(fā)現(xiàn)該植物可以顯著增加正常培養(yǎng)基和高糖培養(yǎng)基環(huán)境中NIT-1細胞釋放胰島素的能力。
　　隨后通過對正常小鼠的淀粉耐量實驗(oralstarchtolerancetest)和蔗糖耐量實驗(oralsucrosetolerancetest)進一步闡明貴州獐牙菜對碳水化合物在體內(nèi)吸收的

4、影響,從體內(nèi)水平證實貴州獐牙菜可以減少機體對碳水化合物的吸收。
　　急性降糖實驗主要是為了考察單次給藥的降血糖效果,觀察貴州獐牙菜總提物對正常小鼠和糖尿病小鼠(小劑量STZ合并高脂高糖飼料誘導的糖尿病小鼠)血糖影響,推測貴州獐牙菜可以通過刺激胰島細胞釋放胰島素來降低血糖水平。
　　經(jīng)過28天給藥后,糖尿病小鼠的空腹血糖值(FastingBloodGluose,FBG)顯著下降;口服糖耐量(OralGlucoseToleran

5、ceTest,OGTT)得到改善;血清胰島素水平也得到提高;血脂代謝異常(高TC、TG、LDL水平,低HDL水平)也得到改善;血清中與氧化保護相關的因子也得到有益的調(diào)節(jié);與體內(nèi)葡萄糖代謝相關的酶(G6Pase、GK)得到調(diào)節(jié),肝糖原合成顯著增加。
　　第二章貴州獐牙菜抗糖尿病化學基礎
　　為了闡明貴州獐牙菜用于糖尿病治療的化學基礎,我們對貴州獐牙菜全草的90％乙醇提取物進行了系統(tǒng)的化學成分研究,共從該植物中分離得到63個化合

6、物,包括17個新化合物。化合物的結構類型主要為三萜、??酮及其苷類、四氫??酮、黃酮苷以及環(huán)烯醚萜等,通過充分的波譜方法(UV、IR、MS、1D和2DNMR)以及與參考文獻的比對,化合物分別被鑒定為:貴州獐牙菜萜A-B(kouitchenoidA-B,1-2)、貴州獐牙菜酮(kouitchensone,3)、貴州獐牙菜苷A-K(kouitchensideA-K,4-14)、四氫貴州獐牙菜苷A-C(tetrahydro-kouitchen

7、sideA-C,15-17)、β-谷甾醇(β-sitosterol,18)、齊墩果酸(oleanolicacid,19)、熊果酸(ursolicacid,20)、1,8-二羥基-3,7-二甲氧基??酮(sweritaperenine,21)、1-羥基-3,7-二甲氧基??酮(1-hydroxy-3,7-dimethoxyxanthone,22)、1,8-二羥基-3,5-二甲氧基??酮(Methylbellidifolin,23)、1-羥

8、基-3,5-二甲氧基??酮(1-hydroxy-3,5-dimethoxyxanthone,24)、1,5,8-三羥基-3-甲氧基??酮(bellidifolin,25)、1,3,8-三羥基-5-甲氧基??酮(isobellidifolin,26)、1-羥基-3,5,8-三甲氧基??酮(1-hydroxy-3,5,8-trimethoxyxanthone,27)、1,3,5,8-四羥基??酮(norbellidifolin,28)、1,

9、7-二羥基-3,4,8-三甲氧基??酮(1,7-dihydroxy-3,4,8-trimethoxyxanthone,29)、1,3,8-三羥基-4,5-二甲氧基??酮(Corymbiferin,30)、1,3-二羥基-4,5-二甲氧基??酮(1,3-dihydroxy-4,5-dimethoxyxanthone,31)、1,7-二羥基-3,4-二甲氧基??酮(Veratrilogenin,32)、1,3,5-三羥基-4-甲氧基??酮(

10、Daphnifolin,33)、1,3,7-三羥基-4-甲氧基??酮(1,3,7-trihydroxy-4-methoxyxanthone,34)、1,7-二羥基-3-甲氧基??酮(Gentianin,35)、1,3,8-三羥基-7-甲氧基??酮(Isoswertianin,36)、1,3-二羥基-5-甲氧基??酮(1,3-dihyroxy-5-methoxyxanthone,37)、1,8-二羥基-3,4,5-三甲氧基??酮(1,8-

11、dihydroxy-3,4,5-trimethoxyxanthone,38)、1-羥基-3,7,8-三甲氧基??酮(Decussatin,39)、1-羥基-3,5,7,8-四甲氧基??酮(1-hydroxy-3,5,7,8-tetramethoxyxanthone,40)、(5R,8S)Campestroside(41)、(5R,8S)tetrahydroswertianolin(42)、1-O-[β-D-吡喃木糖-(1-6)-β-D-

12、吡喃葡萄糖]-3,5-二甲氧基??酮(43)、1-O-[β-D-吡喃木糖-(1-6)-β-D-吡喃葡萄糖]-3,7,8-三甲氧基??酮(44)、1-O-[β-D-吡喃葡萄糖-(1-6)-β-D-吡喃葡萄糖]-8-羥基-3,7-二甲氧基??酮(45)、TriptexanthosideD(46)、Swertianolin(47)、Norswertianolin(48)、芒果苷(Mangiferin,49)、Neolancerin(50)、7

13、-O-[β-D-吡喃鼠李糖-(1-2)-β-D-吡喃木糖]-1,8-二羥基-3-甲氧基??酮(51)、7-O-[β-D-吡喃木糖-(1-6)-β-D-吡喃葡萄糖苷]-1,8-二羥基-3-甲氧基??酮(52)、1-O-[β-D-吡喃木糖-(1-6)-β-D-吡喃葡萄糖苷]-8-羥基-3,7-二甲氧基??酮(53)、7-O-[β-D-吡喃鼠李糖-(1-6)-β-D-吡喃葡萄糖]-5,3’-二羥基-4’-甲氧基二氫黃酮(54)、6-C-葡萄糖

14、-5,7,3’,4’-四羥基黃酮(55)、3-O-[β-D-吡喃鼠李糖-(1-6)-β-D-吡喃半乳糖]-5,7,3’,4’-四羥基黃酮(56)、6-C-葡萄糖-5,7,4’-三羥基黃酮(57)、3-O-[β-D-吡喃鼠李糖-(1-6)-β-D-吡喃半乳糖]-5,7,4’-三羥基黃酮(58)、3-O-[β-D-吡喃鼠李糖-(1-6)-β-D-吡喃葡萄糖]-5,7,4’-三羥基黃酮(59)、6-C-葡萄糖-5,7,4’-三羥基-3’-甲氧

15、基黃酮(60)、獐牙菜苦苷(swertiamarin,61)、紅白金花內(nèi)酯(Erythrocentaurine,62)、SwertiasideA(63)。其中化合物1-17為新化合物,36個化合物(22-23、26-27、30-38、40-46、48-63)為首次從該種植物中分離得到。
　　對所分離得到的化合物進行了體外抗α-glucosidase活性研究。結果表明:化合物5、6、7、12、47、49、53(IC50范圍為126~