竹葉黃酮的抗炎作用及物質(zhì)基礎研究.pdf

1、竹葉是我國傳統(tǒng)中藥，黃酮是其主要化學成分。研究表明竹葉中的黃酮類化合物有良好的抗炎功效，但其抗炎機制和物質(zhì)基礎并不清楚，本文將在前期竹葉抗炎作用的研究基礎上，對竹葉黃酮的抗炎作用做深入研究并闡明其物質(zhì)基礎。
　　為優(yōu)化竹葉中總黃酮的提取工藝，通過正交試驗優(yōu)選竹葉的浸提工藝條件。運用L9(34)正交試驗對竹葉黃酮浸提工藝條件進行優(yōu)化，以總黃酮的含量為檢測指標，選取蘆丁作為對照品，采用紫外分光光度法測定竹葉提取液中總黃酮含量。結(jié)果表明

2、以70％甲醇溶液作為提取溶劑，料液比1:10，每次提取24小時，共提取3次為竹葉黃酮的最佳浸提工藝。
　　為純化竹葉中的黃酮類化合物，以MCI-GEL CHP20P填料洗脫竹葉黃酮提取物，濕法上樣，上樣濃度0.66g/ml，吸附流速為1BV/h，以80%甲醇溶液洗脫，洗脫流速為3BV/h，洗脫4柱體積，最后得到106g竹葉黃酮提取物干膏粉末；為分離竹葉黃酮的不同部位，以聚酰胺樹脂分離竹葉黃酮提取物，濕法上樣，吸附流速為1BV/h，

3、依次用蒸餾水、10%甲醇、30%甲醇、50%甲醇、75%甲醇和100%甲醇洗脫，洗脫速度為2BV/h，每次洗脫3-5柱體積不等，最后得到蒸餾水洗脫部位34.5g、10%甲醇洗脫部位26.3g、30%甲醇洗脫部位7.7、50%甲醇洗脫部位8.6、75%甲醇洗脫部位5.1和100%甲醇洗脫部位1.1g。
　　為測定竹葉不同部位洗脫流份中總黃酮的含量，采用紫外分光光度法進行測量，選取蘆丁作為對照溶液，在507nm處測定竹葉不同位洗脫流份

4、中總黃酮的含量。結(jié)果表明蘆丁對照品線性關(guān)系良好，回歸方程為Y=17.71X+0.0225，r=0.9989，線性范圍為0.01mg-0.20mg，平均加樣回收率為99.41%，RSD=1.3%(n=6)。此方法簡便、準確、重現(xiàn)性好，竹葉不同部位洗脫流份中總黃酮的含量差異較大，流份1、流份2、流份3、流份4、流份5和流份6中總黃酮含量分別為76.16mg/g、138.35mg/g、467.77mg/g、604.46mg/g、797.26m

5、g/g和300.95mg/g，為竹葉中黃酮類化合物的進一步研究提供了科學依據(jù)。
　　通過二甲苯致小鼠耳廓腫脹試驗觀察竹葉各提取部位抗炎作用。結(jié)果表明，地塞米松(DXM)組、流份2至流份5組均對小鼠耳廓腫脹有明顯的抑制作用，與空白對照組比較有極顯著差異(P＜0.01)，其對小鼠耳廓腫脹抑制率依次為：61.88、64.57%、77.13%、62.33%和83.41%，流份1組對小鼠耳廓腫脹有抑制作用，與空白對照組比較有顯著性差異(P＜

6、0.05)，其對小鼠耳廓腫脹抑制率為43.50%，流份6組對小鼠耳廓腫脹無明顯的抑制作用，與空白對照組比較無顯著性差異(P＞0.05)。
　　通過醋酸致小鼠腹腔血管通透性增加試驗觀察竹葉各提取部位抗炎作用。結(jié)果表明，流份5組對小鼠毛細血管通透性的增加有明顯的抑制作用，與空白對照組比較有極顯著差異(P＜0.01)，其對小鼠毛細血管通透性增加的抑制率為66.73%，DXM組對小鼠毛細血管通透性的增加有抑制作用，與空白對照組比較有顯著性

7、差異(P＜0.05)，其對小鼠毛細血管通透性增加的抑制率為53.62%，其余組分均對小鼠毛細血管通透性的增加無明顯的抑制作用，與空白對照組比較無顯著性差異(P＞0.05)。
　　通過小鼠氣囊滑膜炎試驗觀察竹葉各提取部位抗炎作用。結(jié)果表明， DXM組、流份5組均對小鼠氣囊滑膜炎有明顯的抑制作用，與空白對照組比較有極顯著差異(P＜0.01)，其對小鼠氣囊滑膜炎抑制率依次為16.40%和19.55%，其余組分均對小鼠氣囊滑膜炎無明顯的抑

8、制作用，與空白對照組比較無顯著性差異(P＞0.05)。
　　通過小鼠肉芽腫試驗觀察竹葉各提取部位抗炎作用。結(jié)果表明，DXM組、流份5組均對小鼠棉球肉芽腫有明顯的抑制作用，與空白對照組比較有極顯著差異(P＜0.01)，對小鼠棉球肉芽腫抑制率依次為36.98%和38.52%，流份4組對小鼠棉球肉芽腫有抑制作用，與空白對照組比較有顯著差異(P＜0.05)，對小鼠棉球肉芽腫抑制率為29.12%，其余組分均對小鼠棉球肉芽腫無明顯的抑制作用，

9、與空白對照組比較無顯著性差異(P＞0.05)。最后，選取流份5為竹葉抗炎有效部位。
　　采用高效液相-高分辨飛行時間質(zhì)譜(HPLC-HR-TOF/MS)技術(shù)，對流份5中的主要化學成分進行分析。采用Ultimate XB-C18(5μm,3.0×150mm)色譜柱，以乙腈和水(含體積比0.1%甲酸)為流動相，梯度洗脫， ESI-TOF-MS正負離子Auto MSn采集模式。通過HPLC-TOF-MS所得到的化合物分子量以及MS/MS