墊狀卷柏提取物的制備工藝及物質(zhì)基礎(chǔ)研究.pdf

1、墊狀卷柏是民間傳統(tǒng)用藥，現(xiàn)代藥理學(xué)研究證明墊狀卷柏具有抗腫瘤、降血糖、抗菌抗病毒等多種藥理活性，15版《藥典》收載卷柏或墊狀卷柏為藥用品種。雙黃酮類化合物被認(rèn)為是卷柏屬植物的主要藥效成分，其中穗花杉雙黃酮為墊狀卷柏提取物中含量較高的雙黃酮，具有降血糖、抗氧化、抗炎等多種生物學(xué)活性作用。本課題將以穗花杉雙黃酮含量為考察指標(biāo)，對(duì)提取方法、富集工藝進(jìn)行優(yōu)化，并對(duì)富集后的墊狀卷柏提取物進(jìn)行定性分析及活性評(píng)價(jià)，同時(shí)構(gòu)建卷柏藥材指紋圖譜，主要內(nèi)容如

2、下:
　　(1)在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上以乙醇濃度、加醇倍量、提取時(shí)間、提取次數(shù)設(shè)計(jì)響應(yīng)面，優(yōu)化醇提工藝。得到最優(yōu)提取條件:乙醇濃度71％、提取時(shí)間60min、提取次數(shù)3次、加醇倍量12倍，在此條件下，穗花杉雙黃酮提出量為17.28mg/g。以穗花杉雙黃酮含量為主要指標(biāo)，采用大孔樹(shù)脂和二次沉淀兩種簡(jiǎn)單的方法富集墊狀卷柏粗提物，并優(yōu)化工藝參數(shù)。大孔樹(shù)脂最優(yōu)參數(shù):提取物濃度100mg/mL，上樣流速1.0mL/min，80％乙醇洗脫，洗脫流

3、速1.0mL/min，洗脫溶劑用量4倍柱體積，在此條件下提取物中穗花杉雙黃酮含量由原來(lái)的13.79％提高至52.46％;二次沉淀最優(yōu)參數(shù):乙醇濃度30％，水沉溫度5℃，攪拌速度400rpm，加水速度3mL/min，該條件下提取物中穗花杉雙黃酮含量提高至47.92％。大孔樹(shù)脂富集工藝更適用于墊狀卷柏提取物中穗花杉雙黃酮的富集。
　　(2)利用HPLC-MSn技術(shù)結(jié)合化合物碎片信息及文獻(xiàn)資料，對(duì)富集后墊狀卷柏提取物進(jìn)行定性鑒別，共鑒定

4、27個(gè)化合物，其中13個(gè)黃酮類成分、10個(gè)炔酚類成分以及4個(gè)其他類型的化合物，為有效地闡明墊狀卷柏提取物的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供參考價(jià)值。
　　(3)對(duì)富集后的墊狀卷柏提取物進(jìn)行體外降糖活性和抗氧化活性試驗(yàn)。結(jié)果表明墊狀卷柏提取物對(duì)α-葡萄糖苷酶具有較好的抑制作用，其IC50值分別為0.1978mg/mL(阿卡波糖的IC50值為2.6996mg/mL)。DPPH實(shí)驗(yàn)表明墊狀卷柏提取物是一種慢速抗氧化劑，其IC50為184.8μg/mL(

5、VC的IC50值為12.84μg/mL)。
　　(4)對(duì)14批卷柏屬藥材進(jìn)行含量測(cè)定并建立卷柏藥材指紋圖譜的共有模式，指定7個(gè)共有峰，其中卷柏藥材相似度均大于0.8，聚類分析和主成分分析均將樣品分為4類，其中2號(hào)峰（穗花杉雙黃酮）是卷柏藥材分類歸屬的關(guān)鍵成分，從產(chǎn)地分類歸屬看指紋圖譜技術(shù)結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)可為卷柏藥材的整體質(zhì)量評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。
　　本課題對(duì)墊狀卷柏提取物做了較為系統(tǒng)的研究，為其在工業(yè)生產(chǎn)、藥效物質(zhì)基礎(chǔ)、藥品開(kāi)發(fā)