花蕊石抗肝癌活性組分篩選及物質(zhì)基礎研究.pdf

1、目的：
　　 花蕊石為國家課題“重大新藥創(chuàng)制-中藥組分配伍治療肝癌的新藥研究”所選臨床經(jīng)驗復方中主要藥味，本文以中藥花蕊石為研究對象，采用現(xiàn)代分析技術結合體內(nèi)外藥效學實驗，對中藥花蕊石進行抗腫瘤活性組分篩選并對其物質(zhì)基礎進行研究，明確了花蕊石化學組分抗肝癌的藥理作用，為研究開發(fā)新的抗肝癌活性藥物提供了科學依據(jù)。
　　 材料與方法：
　　 采用傅里葉紅外吸收光譜法、X射線粉晶衍射法等測試手段，對花蕊石及其組分礦物質(zhì)

2、蛇紋石、方解石進行礦物種屬、結構的鑒別，并對炮制前后的礦質(zhì)物相變化進行研究。
　　 本文對花蕊石抗腫瘤活性組分進行了兩個層次的篩選研究?？鼓[瘤活性一級篩選以花蕊石生品、花蕊石制品水煎液為實驗對象，以荷瘤小鼠（肝癌H22小鼠）為在體實驗模型，以肝癌Hep G2，SMMC-7721細胞株為實驗癌株，應用MTT法檢測細胞的增殖活性，比較花蕊石生、制品水煎液對腫瘤的抑制作用。二級篩選以花蕊石次級組分方解石、蛇紋石制品水煎液為實驗對象，同

3、法比較二者對腫瘤的抑制作用，并通過體外血清藥理學及體內(nèi)抗肝癌藥效實驗，確認了花蕊石藥效物質(zhì)組分的抗肝癌活性。
　　 采用ICP-MS法對花蕊石炮制前后元素含量及元素溶出量變化、制品水煎液中元素形態(tài)及元素含量的變化進行研究，分析生、制品花蕊石結構及元素分布差異，對花蕊石抗腫瘤活性物質(zhì)基礎進行初步研究。采用ICP-MS法觀測小鼠血清中微量元素變化，初步探討花蕊石藥效物質(zhì)組分與生物效應之間的相互關系。
　　 結果及結論：

4、>　　 1.采用綜合鑒別的方法鑒定中藥花蕊石
　　 經(jīng)鑒定，本實驗選用花蕊石礦石樣品為正品花蕊石（英文名：Ophicalcitum），礦物組分為方解石（化學式：CaCO3，英文名：Calcite）及蛇紋石族礦物利蛇紋石（理想化學式：Mg3[Si2O5]（OH）4，英文名：Serpentine-Lizardite）。
　　 2.首次明確花蕊石制品水煎液抗腫瘤活性強于生品水煎液，首次明確花蕊石抗腫瘤活性物質(zhì)主要來源于其組分

5、蛇紋石。
　　 一級篩選結果表明，制品水煎液的抗腫瘤活性明顯強于生品水煎液（體外對Hep G2細胞的IC50花蕊石制品69.05mg/mL26.79％，
　　 二級篩選結果表明蛇紋石制品水煎液的抑瘤作用明顯強于方解石制品水煎液（體外對Hep G2細胞的IC50蛇紋石制品0.59mg/mL

6、19.43％）。
　　 3.首次驗證了花蕊石抗腫瘤的藥理作用
　　 體內(nèi)外藥效實驗及血清藥理實驗表明，制品花蕊石及其蛇紋石組分水煎液抗肝癌作用藥效明顯。發(fā)現(xiàn)花蕊石中方解石與蛇紋石可能具有協(xié)同作用?；ㄈ锸破?、蛇紋石制品水煎液含藥血清在體外對Hep G2的抑制率分別為38.2％，32.8％；對SMMC-7721的抑制率分別為41.5％，39.3％?；ㄈ锸破匪逡?個劑量組對H22小鼠肝癌實體瘤抑瘤率分別為51.3％，65

7、.3％，44.0％。
　　 4.明確了花蕊石炮制后礦質(zhì)物相及元素形態(tài)變化
　　 利蛇紋石（Mg3[Si2O5]（OH）4）轉變?yōu)殒V橄欖石（Mg2SiO4），方解石（CaCO3）部分發(fā)生分解，生成CaO。Se含量變化率最高（增加55.95％），且浸留比最大，Se為花蕊石作用最大元素及最特征的元素。
　　 5.首次對花蕊石抗肝癌微量元素進行研究
　　 表明中藥花蕊石對肝癌的治療作用與微量元素有關。Cu元素為區(qū)