延胡索抗心肌缺血活性部位物質(zhì)基礎(chǔ)研究.pdf

1、本論文分為五個部分 第一部分文獻研究綜述了近20年延胡索化學(xué)與藥理學(xué)研究概況，包括化合物結(jié)構(gòu)、藥效學(xué)、藥物代謝動力學(xué)及毒性，并對其在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和心腦血管系統(tǒng)的作用和可能機制進行重點歸納。參考文獻93篇。 第二部分延胡索中生物堿的富集工藝研究及抗心肌缺血活性部位篩選與驗證以總生物堿含量為指標(biāo)確定了延胡索生物堿部位的純化工藝。通過對不同樹脂的篩選，確定了X-5型大孔樹脂對總生物堿成分具有良好的吸附分離性能。樹脂最大動態(tài)上樣

2、量為1.99g生藥/1ml樹脂，以稀堿水洗脫10倍樹脂體積后，用50％乙醇洗脫，洗脫體積為10倍樹脂體積，樹脂經(jīng)95％乙醇和1％HCI再生后重復(fù)使用。3批樣品的制備和含量測定結(jié)果顯示純化工藝較穩(wěn)定，總生物堿含量大于50％。通過比較各部分提取物的抗心肌缺血活性，篩選得到了延胡索抗心肌缺血活性部位，驗證了延胡索生物堿部位的抗心肌缺血活性。 第三部分活性部位化學(xué)成分研究采用多種純化分離方法和結(jié)構(gòu)鑒定技術(shù)(UV，IR，ESI-MS，HR

3、MS，1HNIVIR，13CNMR，HMBC，NOESY)對延胡索抗心肌缺血活性部位的化學(xué)成分進行系統(tǒng)研究，從中分離得到11個化合物，均為生物堿。其中叔胺堿2個，季銨堿9個(原小檗堿型季銨堿8個，阿樸菲型季銨堿1個)。其中新化合物1個，結(jié)構(gòu)確定為5，6-二氫-10-羥基-2，3，9-三甲氧基-13-甲基-二苯基[a,g]喹嗪(5，6-dihydro-10-hydroxy-2，3，9-trimethoxy-13-methyl-Dibenz

4、o[a,g]quinolizinium)，暫命名為13-甲基脫氫紫堇達明堿(13-methyl-dehydrocorydalmine)；新天然產(chǎn)物1個，結(jié)構(gòu)確定為13-methyl-palmatrubine；三個化合物為首次從延胡索中獲得，分別為降氧化北美黃連次堿(noroxyhydrastinine)，corunine和dehydrocorybulbine。其它生物堿分別為四氫非洲防己堿(tetrahydrocolumbamine)，

5、脫氫延胡索堿(dehydrocorydaline)，非洲防己堿(columbamine)，黃連堿(coptisine)，巴馬汀(palmatine)和小檗堿(berberine)。 第四部分活性部位定性定量分析建立了延胡索活性部位的薄層鑒別方法。 采用酸性染料比色法建立了延胡索活性部位總生物堿的定量測定方法，結(jié)果表明方法精密性和重現(xiàn)性良好，回收率符合要求，可作為延胡索活性部位的質(zhì)量控制方法之一。 建立了延胡索活性

6、部位的HPLC特征指紋圖譜。通過對9批樣品的色譜檢測和圖譜分析，確認指紋圖譜的主要技術(shù)參數(shù)為：在335nm下，有12個共有指紋峰，其相對保留時間RSD為0.10％～1.48％。相對峰面積RSD為3.57％～26.01％。共有峰占總峰面積比90％。 采用HPLC-MS-MS技術(shù)和添加對照品的方法對共有峰進行了指認。12個共有色譜峰中，確定了其中的11個，9個峰為季銨堿類成分，其峰面積占總峰面積的80％以上，初步證明季銨堿成分是延胡

7、索抗心肌缺血的主要活性成分。 采用HPLC法，對延胡索活性部位中的8種季銨堿類成分(dehydrocorydaline，columbamine，coptisine，palmatine，13-methyl-dehydrocorydalmine，13-methyl-palmatrubine．dehydrocorybulbine，berberine)的含量進行了同時測定，建立了靈敏，快速，可靠的含量測定方法，為制定科學(xué)、合理、嚴格的質(zhì)

8、量評價體系奠定了基礎(chǔ)。 第五部分活性成分吸收分布初步研究采用HPLC-MS-MS技術(shù)，對灌胃給藥后大鼠體內(nèi)的生物堿原型及其代謝產(chǎn)物進行了檢測。結(jié)果表明活性部位中含量較大的季銨堿成分如脫氫延胡索堿，巴馬汀，小檗堿等在血液和組織中均能檢測到，說明延胡索季銨堿成分能通過口服被胃腸道吸收。此外，還發(fā)現(xiàn)部分季銨堿以葡萄糖醛酸綴合物形式存在的體內(nèi)代謝產(chǎn)物。 在定性研究延胡索活性部位入血成分的基礎(chǔ)上，對其中的4種主要入血季銨堿成分的體