三七有效部位藥效物質基礎研究;紅花中抗腦缺血活性成分質譜裂解行為及分布研究.pdf

1、本論文包括三七有效部位藥效物質基礎研究和紅花中抗腦缺血活性成分質譜裂解行為及體內分布研究兩個部分。 三七為五加科植物三七Panax notoginseng(Burk．)F．H．Chen的干燥根。具有散瘀止血，消腫定痛的功效。大量藥物化學及藥理學實驗數(shù)據(jù)表明：皂苷類成分為三七的主要活性成分之一，其皂苷類型主要為達瑪烷型四環(huán)三萜(人參皂苷)。目前國內外對該類成分的研究報道較多，包括質譜裂解行為、在線鑒定、定量分析方法及代謝研究等，其

2、研究重點主要針對常量皂苷類成分。由于受常規(guī)分離方法所限，對其微量成分的信息知之甚少，然而中藥是一個復雜體系，即使僅由皂苷類成分組成的有效部位，除常量成分外尚有很多微量甚至痕量成分客觀存在，因此有必要對這些微量成分進行鑒定。本論文即主要針對三七有效部位中微量皂苷類成分進行研究，以進一步闡明其藥效物質基礎。 基于以上研究目的，本論文首先對12個皂苷對照品進行了ESI—MSn和HPLC/ESI_MSn裂解行為研究，總結了特征性碎片離子

3、及其強度與結構的關系，并深入探討了其裂解機理與結構間的內在聯(lián)系，建立了可用于解析皂苷糖鏈、苷元及二者連接信息的在線鑒定策略。另外，在對三七有效部位中常量皂苷類成分含量測定的基礎上，發(fā)現(xiàn)其量大成分對微量成分的檢出存在較大干擾，據(jù)此提出利用色譜方法除去有效部位中量大成分，從而在現(xiàn)有條件下大大提高了微量成分的檢出靈敏度。最后，運用以上總結的皂苷類成分裂解規(guī)律和在線鑒定策略，對富集微量皂苷類成分的部位進行HPLC/HRMS、HPLC/DAD/E

4、SI—MSn測定，鑒定或推測了151個常量及微量皂苷類成分的結構，其中56個為新化合物。 上述研究為快速、有效識別并鑒定植物提取物中的微量成分提供了有益的借鑒，同時為進一步開展三七指紋圖譜、闡明三七有效部位中藥效物質基礎及其代謝研究奠定基礎。 紅花為菊科(Compositae)植物Carthamus tinctorius L．的干燥管狀花。具有活血通經、散瘀止痛、降低膽固醇、降血壓等功效。醌型查耳酮類化合物為其發(fā)揮活血化

5、淤功效的主要活性成分，這類化合物屬色素類成分極性較大，分離純化過程比較困難，因此有必要對其UV、ESI—MS、ESI—MSn等譜學特征進行研究，總結出可用于該類成分在線結構鑒定的譜學規(guī)律。 本論文利用ESI—MSn及HPLC/DAD/ESI—MSn等方法，研究了紅花中醌型查耳酮類成分質譜裂解行為，通過分析該類化合物的UV吸收特征，正負離子模式下所表現(xiàn)的不同裂解特征，并以HPLC—HRMSn數(shù)據(jù)對可能的裂解機制進行驗證，總結了該類

6、化合物的質譜裂解規(guī)律。為快速、有效識別并鑒定植物提取物中醌型查耳酮類化合物提供分析方法，并為進一步開展該類化合物代謝研究奠定基礎。 羥基紅花黃色素A(hydroxysafflor yellow A，HSYA)是從紅花中分離得到的醌型查耳酮類化合物，該化合物具有較強的抗腦缺血活性。然而對于HSYA抗腦缺血可能的作用部位，是否可透過血腦屏障而發(fā)揮作用等方面的研究目前報道較少。本論文在對紅花中醌型查耳酮類成分質譜裂解行為研究的基礎上，

7、開展了紅花中抗腦缺血活性成分HSYA在血漿、腦組織及細胞中的分布研究。探討了HSYA作為抗腦缺血藥物，在不同組別大鼠(正常組與腦缺血模型組)、不同時間點(3、6、12、24h)、不同給藥方式(單次給藥與多次給藥)及在不同部位腦組織(腦干、皮層、海馬區(qū)、小腦)中的分布特征。研究表明，HSYA作為極性小分子化合物可以透過大鼠血腦屏障；其在不同組別動物、不同給藥方式、不同部位腦組織及不同時間點的分布均存在顯著性差異。該研究結果可為進一步探索H