三七活血止血有效物質(zhì)基礎(chǔ)表征研究.pdf

1、本論文分為五章。第一章對(duì)三七及止血藥的研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述。第二章建立了三七有效部位的制備方法。第三章對(duì)三七有效部位的質(zhì)量控制進(jìn)行了研究。第四章對(duì)三七有效部位活血止血特性及其不同組合進(jìn)行藥效學(xué)研究。第五章對(duì)三七有效部位不同組合HPLC指紋圖譜表達(dá)進(jìn)行了初步的比較分析研究。 第一章對(duì)三七的化學(xué)成分、生物活性及其他止血類中藥進(jìn)行綜述，共引用文獻(xiàn)76篇。 第二章對(duì)三七有效部位的制備工藝進(jìn)行了研究首先優(yōu)選了三七的提取工藝。以總皂苷

2、、皂苷指標(biāo)性成分及總氨基酸含量為指標(biāo)，對(duì)三七的提取工藝進(jìn)行了考察。經(jīng)數(shù)據(jù)分析，得出三七有效部位的最佳提取工藝條件為：A2％乙醇提取B3次，每次C3小時(shí)，溶劑用量為D1倍量。繼而對(duì)大孔樹(shù)脂分離富集三七總皂苷有效部位的工藝參數(shù)進(jìn)行了篩選和優(yōu)化。以總皂苷和人參皂苷Rg1，人參皂苷Rb1及三七皂苷R1含量為指標(biāo)，對(duì)樹(shù)脂類型進(jìn)行了篩選。通過(guò)測(cè)定分析5種大孔吸附樹(shù)脂對(duì)總皂苷和人參皂苷Rg1，人參皂苷Rb1及三七皂苷R1的吸附特性，并綜合考慮多方面因

3、素，得出A型大孔吸附樹(shù)脂對(duì)三七有效部位中總皂苷和人參皂苷Rg1，人參皂苷Rb1及三七皂苷R1的吸附量大，解吸容易且洗脫物中有效成分的含量高，是一種性能良好的三七總皂苷有效部位的吸附劑。同時(shí)對(duì)A型大孔吸附樹(shù)脂應(yīng)用工藝進(jìn)行了研究，對(duì)其富集分離參數(shù)進(jìn)行了考察，確定最佳樹(shù)脂分離富集條件為：上樣量(相當(dāng)于生藥克數(shù))與樹(shù)脂體積比為A1，洗脫溶劑為B2％乙醇，柱床徑高比為C2，上樣液濃度為E3g/ml(相當(dāng)于生藥材)，吸附流速為D1ml/min，水洗

4、脫流速為F2ml/min，洗脫體積為G10BV，B2％乙醇洗脫流速為F2ml/min，洗脫體積為H14BV。該方法簡(jiǎn)便，得率較高，可推廣應(yīng)用于生產(chǎn)。之后優(yōu)選了離子交換樹(shù)脂分離富集三七總氨基酸有效部位的工藝參數(shù)。以總氨基酸含量為指標(biāo)，對(duì)A型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂應(yīng)用工藝進(jìn)行了研究，對(duì)其富集分離參數(shù)進(jìn)行了考察，確定最佳樹(shù)脂分離富集條件為：上樣量(相當(dāng)于生藥克數(shù))與樹(shù)脂體積比為C3，蒸餾水洗脫體積為A1BV，上樣液pH=B2，柱床徑高比為D2，上樣液

5、濃度為E2g/ml(相當(dāng)于生藥材)，上樣流速為F3BV/h，洗脫溶劑為G2％氨水，洗脫流速為H2BV/h，洗脫體積為M10BV。該方法經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)便，可推廣應(yīng)用于生產(chǎn)。 第三章對(duì)三七有效部位質(zhì)量控制方法進(jìn)行了研究采用紫外一可見(jiàn)分光光度法對(duì)三七總皂苷有效部位中總皂苷的含量及三七總氨基酸有效部位中總氨基酸的含量進(jìn)行了測(cè)定。總皂苷的測(cè)定以人參皂苷Rg1為指標(biāo)性成分分析，采用香草醛-高氯酸比色法，人參皂苷Rg1回歸方程為y=6.0733x-0

6、.0031(r=0.9996)n=6，表明人參皂苷Rg1在0.0234～0.1404mg之間與吸收度呈良好的線性關(guān)系。經(jīng)測(cè)定，有效部位中總皂苷的含量為73.37％，RSD=1.02％，加樣回收率為99.03％，RSD=2.28％?？偘被岬臏y(cè)定以谷氨酸為指標(biāo)性成分分析，采用茚三酮比色法，谷氨酸回歸方程為y=0.8612x-0.0096(r=0.9997)n=6，表明谷氨酸在0.226～0.678mg之間與吸收度呈良好的線性關(guān)系。經(jīng)測(cè)定，

7、樣品中總氨基酸的含量為11.53％，RSD=1.35％，加樣回收率為99.04％，RSD=2.42％。采用高效液相色譜法，對(duì)總皂苷有效部位中的人參皂苷Rg1，人參皂苷Rb1及三七皂苷R1進(jìn)行了含量測(cè)定。人參皂苷Rg1的標(biāo)準(zhǔn)曲線為：y=279.55x+12.98(r=0.9999)n=5；表明人參皂苷Rg1在2.184～7.28μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。人參皂苷Rb1標(biāo)準(zhǔn)曲線為：y=233.54x+8.9944(r=0.9999)n=5，表

8、明人參皂苷Rb1在2.76～9.2μg范圍內(nèi)性關(guān)系良好；三七皂苷R1標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=252.1x+2.0477(r=0.9999)n=5，表明三七皂苷R1在0.4872～1.624μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。采用高效液相色譜法，對(duì)三七總氨基酸有效部位中的主要指標(biāo)性成分三七素進(jìn)行了分析。三七素的標(biāo)準(zhǔn)曲線為：y=2286.5x+14.35(r=0.9999)n=5，表明三七素在0.432～1.44μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。 第四章對(duì)三七有效

9、部位活血止血特性及其不同組合進(jìn)行藥效學(xué)研究分別考察了三七有效部位不同組合對(duì)香豆素致凝血障礙小鼠及正常小鼠出血時(shí)間的影響。對(duì)香豆素致凝血障礙小鼠出血時(shí)間的影響考察結(jié)果表明組合3與模型組的顯著性差異最大；組合4和組合5有較大的顯著性差異。對(duì)正常小鼠出血時(shí)間的影響考察結(jié)果表明組合3與空白對(duì)照組的顯著性差異最大；組合4，組合5及組合6有較大的顯著性差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明總氨基酸和總皂苷的組合變化對(duì)出血的治療效果有很大的影響。 第五章對(duì)三七有