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文檔簡(jiǎn)介
1、本文選用唐代孫思邈《千金方》中收載藥方[1]:生地黃湯為對(duì)象,研究了方中的君藥生地黃的藥效物質(zhì)基礎(chǔ),并對(duì)由此基礎(chǔ)發(fā)展而來(lái)的海綿劑進(jìn)行了制備工藝、質(zhì)量評(píng)價(jià)等方面的研究。
目的:初步篩選生地黃止血作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。研究生地黃止血有效部位HPLC指紋圖譜。優(yōu)選生地黃的提取工藝,篩選出最佳工藝參數(shù)。篩選生地黃止血海綿劑的最佳制備工藝。建立生地黃止血海綿劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
方法:采用經(jīng)典的系統(tǒng)溶劑法(極性由小到大:石油醚
2、-乙酸乙酯-正丁醇-乙醇)提取生地黃水煎液,用剪尾法和毛細(xì)玻管法測(cè)定出、凝血時(shí)間,比較各部位的止血作用;將篩選出的有效部位用大孔吸附樹脂進(jìn)行分離純化,用不同濃度乙醇進(jìn)行梯度洗脫,用剪尾法和毛細(xì)玻管法測(cè)定出、凝血時(shí)間,比較各洗脫部位的止血作用。采用高效液相色譜法,Akasil-C18柱(250mm×4.6mm,5μm),乙腈-水梯度洗脫,檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm,流速1.0ml/min,柱溫30℃。確定了生地黃止血有效部位的10批指紋圖譜共有
3、模式,進(jìn)行了相似度比較。以樣品中多糖含量、各指紋峰相對(duì)于梓醇含量的加和作為評(píng)價(jià)指標(biāo),考察藥材浸泡時(shí)間,加水量,提取時(shí)間等因素對(duì)生地黃提取工藝的影響。采用單因素實(shí)驗(yàn)法,以外觀質(zhì)量、吸水力為評(píng)價(jià)指標(biāo),考察海綿劑的輔料種類、藥物與明膠比例2個(gè)因素對(duì)海綿劑成型性的影響。采用薄層色譜法對(duì)止血海綿中生地黃進(jìn)行定性鑒別;采用高效液相色譜法測(cè)定了各指紋峰相對(duì)于梓醇的含量;采用紫外分光光度法測(cè)定止血海綿中多糖含量。
結(jié)果:乙醇部位可明顯縮短
4、小鼠的出、凝血時(shí)間;水洗脫液、30%乙醇洗脫液、80%乙醇洗脫液均能縮短小鼠的出、凝血時(shí)間,水洗脫液劑量與止血作用有明顯的正相關(guān)性,30%乙醇洗脫液量效關(guān)系不明顯,80%乙醇洗脫液止血作用量效關(guān)系呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)性。確定了生地黃止血有效部位的10批指紋圖譜共有模式,進(jìn)行了相似度比較。最佳提取工藝為:藥材用12倍量水,浸泡15min,提取時(shí)間為1.5h,提取3次。海綿劑的輔料選用明膠、吐溫-80,藥物與明膠比例為1:1。定性鑒別薄層色譜斑點(diǎn)清晰
5、;葡萄糖在0.0067~0.067mg/ml呈良好線性關(guān)系;梓醇在0.13~2.6μg.呈良好線性關(guān)系。
結(jié)論:生地黃止血作用的藥效活性物質(zhì)大多存在于乙醇部位,其止血作用的活性成分與糖類、環(huán)烯醚萜苷類有關(guān)。所建立的方法可用于生地黃止血有效部位指紋圖譜測(cè)定,并可對(duì)其制劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。該提取工藝參數(shù)客觀可行、穩(wěn)定合理,可為工業(yè)化生產(chǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。通過(guò)指標(biāo)考察,制備工藝合理可行,成品質(zhì)量基本穩(wěn)定。建立生地黃止血海綿劑的
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