肺癌胸腔積液TIL細(xì)胞TCRVβ亞家族表達(dá)及體外活性研究.pdf

1、目的:
　　研究肺癌胸腔積液患者腫瘤浸潤性淋巴細(xì)胞（TIL）中T細(xì)胞受體（TCR）Vβ亞家族的表達(dá)利用特點及經(jīng)白細(xì)胞介素2（IL2）刺激后TIL細(xì)胞體外活性改變，為臨床過繼性免疫療法應(yīng)用提供實驗依據(jù)。
　　方法:
　　1．貼壁法分離肺癌胸腔積液患者TIL細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞，用流式細(xì)胞儀檢測TIL細(xì)胞TCRVβ亞家族的優(yōu)勢取用情況。
　　2．IL2體外活化擴(kuò)增TIL細(xì)胞，分別于3天、7天、14天、21天、28天、35天

2、常規(guī)法計算增殖細(xì)胞數(shù)量，流式細(xì)胞儀檢測CD4、CD8及CD56分子在TIL細(xì)胞表面表達(dá)情況，將TIL細(xì)胞與自體腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)24小時后，MTT法檢測不時間段 TIL細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷效果。
　　結(jié)果:
　　1．與健康人對照組外周血單個核細(xì)胞（PBMC）相比，45例肺癌合并胸腔積液患者TIL細(xì)胞均出現(xiàn)不同程度的TCRVβ亞家族優(yōu)勢取用情況，其中以TCRVβ5.2、Vβ5.3、Vβ8、Vβ9、Vβ13.1、Vβ14增高較為明顯

3、，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2．TIL細(xì)胞經(jīng)IL2刺激7天后開始出現(xiàn)體外擴(kuò)增，平均28天到達(dá)擴(kuò)增高峰，最高擴(kuò)增倍數(shù)為190±50倍。分子表型表現(xiàn)為 CD4+比例下降、CD8+、CD56+TIL細(xì)胞比例增高。腫瘤殺傷實驗表明，經(jīng)IL2活化后TIL細(xì)胞體外細(xì)胞毒性明顯大于活化前，且與培養(yǎng)時間相關(guān)，在28天殺傷活性最強(qiáng)，殺傷率為70±10％，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1．肺癌胸腔積液