2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、日本血吸蟲分布廣泛,危害嚴(yán)重,為人、畜共患的重要寄生蟲病之一。動物(特別是牛)是中國血吸蟲病最重要的傳染源。目前診斷家畜日本血吸蟲病的方法主要是糞檢等病原學(xué)方法和間接血凝、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等血清學(xué)方法。這些方法或費(fèi)時、費(fèi)力,或需要儀器設(shè)備,不適合于在基層和現(xiàn)場大規(guī)模推廣使用。本研究利用膠體金標(biāo)記技術(shù),初步研制了家畜血吸蟲病診斷層析條,為尋找敏感性強(qiáng)、特異性高且適合于現(xiàn)場診斷家畜血吸蟲病的診斷監(jiān)測技術(shù)開辟了新途徑。 診斷抗原的制備

2、與篩選:用日本血吸蟲尾蚴感染新西蘭大白兔,于感染后42天取肝臟分離蟲卵,經(jīng)裂解提取可溶性蟲卵抗原(SEA),將SEA通過SephdaxG-200柱純化,分成SEA1和SEA2兩個組分;利用BL21(DE3)原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)日本血吸蟲23KD大親水區(qū)(LHD-Sj23)編碼基因,通過GST親和層析柱純化,制備了基因工程重組抗原LHD-Sj23/pGEX。通過間接ELISA方法比較SEA、SEA1、SEA2和LHD-Sj23/pGEX四種抗

3、原對綿羊日本血吸蟲病的診斷效果,篩選合適抗原用于試紙條的制備。結(jié)果SEA、SEA1和LHD-Sj23/pGEX三種抗原都得到了較高的敏感性和特異性;以這三種抗原為診斷抗原對綿羊早期日本血吸蟲病的診斷進(jìn)行比較,SEA及SEA1的診斷效果比LHD-Sj23/pGEX基因重組抗原要好。綜合分析后以SEA作為診斷抗原進(jìn)行下述研究。 診斷試紙條的研制:以SEA為免疫原,并以206為佐劑免疫新西蘭大白兔(瓊擴(kuò)效價1:32),用硫酸銨鹽析法純

4、化抗SEA抗體。按檸檬酸鈉還原法制備顆粒約為40nm的膠體金,用紫外分光光度計進(jìn)行掃描鑒定后,標(biāo)記SEA。分別以SEA及抗SEA抗體包被Nc膜作為檢測線和質(zhì)控線,利用雙抗原夾心法,根據(jù)優(yōu)化的制備試紙條的條件制備試紙條。對試紙條在診斷家畜血吸蟲病方面進(jìn)行了初步應(yīng)用研究,結(jié)果表明所制備的試紙條能應(yīng)用于多種動物血吸蟲病的診斷,診斷綿羊血吸蟲病其敏感性為91.6﹪,特異性為87.5﹪,與肝片吸蟲病血清有較少的交叉反應(yīng),與伊氏錐蟲病血清無交叉反應(yīng)

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