重組抗原pGEX-BSjGCP-BSj23診斷家畜日本血吸蟲病研究.pdf

1、日本血吸蟲病流行于我國南方十二省（直轄市、自治區(qū)），給人類和動物的健康造成嚴(yán)重威脅。準(zhǔn)確的診斷是做好血防工作的前提；而現(xiàn)有的日本血吸蟲病診斷方法不能滿足診斷需要，因此尋求一種更為敏感、特異，并且具有療效考核價值的診斷方法是當(dāng)前的迫切需要。
　　 本文摸索確定了重組表達(dá)菌pGEX-BSjGCP-BSj23/BL21和pGEX-LHD-Sj23/BL21的最佳表達(dá)條件；比較了尿素變性-透析復(fù)性法與Protein Refolding

2、Kit兩種包涵體蛋白純化方法，優(yōu)化了重組抗原pGEX-BSjGCP-BSj23包涵體蛋白的純化技術(shù)；通過方陣試驗，優(yōu)化了ELISA實驗條件；以重組抗原pGEX-BSjGCP-BSj23（BSjGCP為日本血吸蟲抱雌溝蛋白相關(guān)表位，Bsj23為日本血吸蟲23kD表膜蛋白相關(guān)表位）和pGEX-LHD-Sj23（日本血吸蟲23kD表膜蛋白的大親水區(qū)片段）以及日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原SjSEA作為診斷抗原，分別檢測了70份健康水牛血清和104份

3、感染日本血吸蟲病水牛血清，比較三種抗原獲得的敏感性和特異性；應(yīng)用pGEX-BSjGCP-BSj23-ELISA法檢測不同感染強(qiáng)度水牛血清，評價該重組抗原的診斷價值；以重組抗原pGEx-BSjGCP-BSj23和pGEX-LHD-Sj23以及可溶性蟲卵抗原SjSEA作為診斷抗原，平行檢測了實驗兔感染日本血吸蟲前，感染日本血吸蟲后2周、4周、6周以及用血吸蟲病治療藥物吡喹酮治療后每月兔血清中三種抗原特異性抗體水平，分析兔血清中三種特異性抗體

4、的消長變化，評價三種檢測方法的療效考核價值。
　　 結(jié)果表明，以重組抗原pGEX-BSjGCP-BSj23和可溶性蟲卵抗原SjSEA作為診斷抗原，檢測水牛血吸蟲病，兩者獲得的敏感性相當(dāng)，但前者獲得的特異性略高于后者，兩者獲得的診斷效果均優(yōu)于重組抗原pGEx-LHD-Sj23；重組抗原pGEX-BSjGCP-BSj23對于低感染強(qiáng)度水牛血清也具有一定的診斷效果；實驗兔血清中抗重組抗原pGEX-BsjGCP-BSj23特異性抗體在感