TNF-α、MMP-2,MAPK和NF-κB在人類子宮肌瘤發(fā)病機(jī)制中的作用.pdf

1、目的：
　　子宮肌瘤是女性生殖器官中最常見的良性腫瘤，發(fā)病機(jī)理不楚。已有研究證明在正常子宮肌轉(zhuǎn)變成子宮肌瘤以及子宮肌瘤體積增長的過程中均伴隨著腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factors-alpha，TNF-α)和腫瘤壞死因子受體I(tumor necrosis factor receptor I，TNF RI)表達(dá)的變化。檢測TNF-α、MMP-2、MAPK和NF-κB在人子宮肌瘤中的表達(dá)，探討其在子宮肌瘤發(fā)病

2、中的作用，為臨床治療提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　(1)收集子宮肌瘤組織和鄰近正常的子宮肌組織為對照，采用Western blot和real-time PCR檢測組織中TNF-α的表達(dá)；(2)采用酶消化法分離培養(yǎng)人子宮平滑肌細(xì)胞(Human myometrium smooth muscle cells，HM-SMCs)及人子宮肌瘤平滑肌細(xì)胞(Human leiomyoma smooth muscle cells，HL-SM

3、Cs)，Western blot，real-time PCR檢測細(xì)胞中TNF-α、MMP-2的表達(dá)情況；(3)20 ng/mlTNF-α處理HM-和HL-SMCs，作用0，5min，15min，30min，60min，Western blot檢測p44/42MAPK、IκBα的表達(dá)及磷酸化變化；20ng/mlTNF-α處理HM-和HL-SMCs作用0，2h，12h，24h，48h，檢測MMP-2蛋白表達(dá)，real-time PCR檢測M

4、MP-2 mRNA的表達(dá)；(4)用p44/42 MAPK信號通路抑制劑PD98059處理細(xì)胞后檢測p44/42MAPK的表達(dá)及磷酸化；用NF-κB信號通路抑制劑Bay11-7082處理細(xì)胞后檢測IκBα的表達(dá)及磷酸化變化；Western blot檢測PD98059、Bay11-7082預(yù)處理后TNF-α誘導(dǎo)的MMP-2的變化。
　　結(jié)果：
　　1.與相應(yīng)的正常子宮肌相比，卵泡期子宮肌瘤組織中的TNF-α、MMP-2表達(dá)升高，

5、而黃體期子宮肌和子宮肌瘤的表達(dá)差異不明顯。TNF-α處理細(xì)胞后，用Western blots和Real-time PCR方法檢測MMP-2的時間依賴性變化，結(jié)果顯示卵泡期HL-SMCs中MMP-2表達(dá)量隨TNF-α的作用時間延長而升高。TNF-α作用24h、48h時，MMP-2表達(dá)顯著升高，而在卵泡期HM-SMCs中TNF-α作用時間與MMP-2的表達(dá)無明顯關(guān)系。
　　2.TNF-α能夠激活卵泡期HL-SMCs中的p44/42 M

6、APK信號通路，且呈時間依賴性激活，TNF-α作用15min時最明顯；并且MEK抑制劑PD98059能夠抑制TNF-α誘導(dǎo)的p44/42 MAPK磷酸化；卵泡期HM-SMCs中phospho-p44/42MAPK無明顯改變。
　　3.TNF-α誘導(dǎo)的total-IκBα和phospho-IκBα在卵泡期HM-和HL-SMCs中的變化趨勢基本一致，TNF-α作用5min時phospho-IκBα升高最明顯；NF-κB信號通路抑制劑B

7、ay117082能夠抑制卵泡期HL-SMCs中TNF-α對phospho-IκBα的誘導(dǎo)作用，對卵泡期HM-SMCs中TNF-α誘導(dǎo)的IκBα磷酸化無明顯抑制作用。
　　4.用PD98059和Bay11-7082對細(xì)胞預(yù)處理后，可明顯抑制卵泡期HL-SMCs中TNF-α誘導(dǎo)的MMP-2蛋白表達(dá)上調(diào)。
　　結(jié)論：
　　卵泡期子宮肌瘤中高表達(dá)TNF-α、MMP-2，TNF-α可時間依賴性激活卵泡期HL-SMCs中NF-κB