EGCG影響TNF-α誘導(dǎo)的NF-κB入核及促凋亡效應(yīng).pdf

1、目的:觀察表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate,EGCG)誘導(dǎo)人胃癌SGC-7901細(xì)胞凋亡,探討其作用機(jī)制是否與調(diào)節(jié)細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子κB(NF-κB)入核有關(guān)。
　　方法:Hoechst染色法檢測(cè)SGC-7901細(xì)胞經(jīng)EGCG處理前后凋亡形態(tài)學(xué)改變;采用10ng/ml腫瘤壞死因子-α(TNF-α)作為NF-κB入核誘導(dǎo)劑,應(yīng)用Western Blot方法探討TNF-α對(duì)NF-κB入核影響,

2、同時(shí)Western Blot方法也用于觀察EGCG作用前后NF-κB蛋白在胞漿內(nèi)及胞核內(nèi)的變化;PI染色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)EGCG調(diào)節(jié)NF-κB入核前后細(xì)胞凋亡率改變;DNA瓊脂糖凝膠電泳觀察EGCG誘導(dǎo)細(xì)胞DNA斷裂情況。
　　結(jié)果:Hoechst染色法顯示,EGCG處理后部分細(xì)胞呈現(xiàn)典型凋亡形態(tài)改變:核致密濃染或呈碎塊狀、蒼白色。Western Blot方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn),10ng/ml的TNF-α作為NF-κB入核誘導(dǎo)劑分別作用SGC

3、-7901細(xì)胞30、60、90、120min后,核內(nèi)NF-κB/p65明顯增多并在60min時(shí)出現(xiàn)平臺(tái)期;60μg/ml的EGCG預(yù)處理細(xì)胞不同時(shí)間(0、12、24、36、48h)后,再以10ng/ml的TNF-α處理60min,檢測(cè)發(fā)現(xiàn)核內(nèi)NF-κB明顯下降并在24h時(shí)出現(xiàn)平臺(tái)期;不同濃度EGCG(40、60、80、100μg/ml)預(yù)處理細(xì)胞24h后,再加10ng/ml的TNF-α處理60min,核內(nèi)NF-κB呈濃度依賴性下降。流式

4、細(xì)胞術(shù)顯示,10ng/ml的TNF-α處理細(xì)胞60min后,細(xì)胞凋亡率為(3.73±0.15)％,60μg/ml EGCG處理細(xì)胞24h后,再以10ng/ml的TNF-α處理細(xì)胞60min,凋亡率為(16.63±0.15)%;NF-κB通路阻斷劑吡咯啉烷二甲基硫脲(Pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)100μmol/L預(yù)處理30min后再以10ng/ml的TNF-α處理細(xì)胞60min,細(xì)胞凋亡率為(21.4