原花青素B2、瑞香素對(duì)TNF-α誘導(dǎo)大鼠滑膜細(xì)胞NF-κB核轉(zhuǎn)運(yùn)及其相關(guān)因子的影響.pdf

1、[目的]
　　 NF-κ B是一種能與免疫球蛋白κ輕鏈基因的增強(qiáng)子κ B序列特異結(jié)合的蛋白因子。靜息狀態(tài)在細(xì)胞漿中以無(wú)活性的形式存在，但受外界因子激活后，迅速活化，通過(guò)核轉(zhuǎn)運(yùn)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核與DNA特異位點(diǎn)結(jié)合，啟動(dòng)下游相關(guān)基因的表達(dá)，廣泛參與炎癥，癌癥的發(fā)生、發(fā)展。本實(shí)驗(yàn)以NF-κB為靶點(diǎn)，研究原花青素B2(Procyanidins B2 PCB2)和瑞香素(daphnetin DA)對(duì)大鼠滑膜細(xì)胞(RSC-364)的抗炎機(jī)理。<

2、br>　　 [方法]
　　 MTT法檢測(cè)PCB2和DA對(duì)RSC-364生長(zhǎng)增殖的影響；免疫熒光雙染色觀察PCB2和DA對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的RSC-364 NF-κB的核轉(zhuǎn)運(yùn)；Westernblot法檢測(cè)NF-κB(P65)、COX-2、Iκ Bα蛋白表達(dá)水平；RT-PCR檢測(cè)COX-2、IKBα mRNA的表達(dá)；ELISA試劑盒檢測(cè)細(xì)胞上清液中IL-1β、VEGF細(xì)胞因子及炎癥介質(zhì)LTB4的水平；Griess Reagent法檢

3、測(cè)細(xì)胞上清液NO含量。
　　 [結(jié)果]
　　 (1)3.125μM-25μM的PCB2和6.25μM-50μM的DA對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖沒(méi)有影響；(2)PCB2和DA均能明顯抑制RSC-364 NF-κB/P65核轉(zhuǎn)運(yùn)并存劑量依賴關(guān)系。(3)PCB2和DA保護(hù)TNF-α誘導(dǎo)的RSC-364細(xì)胞IKBα降解；(4)PCB2和DA劑量性抑制COX-2基因的表達(dá)；(5)PCB2和DA降低細(xì)胞上清液中IL-1β、LTB4、VEGF、