MAPK信號(hào)通路在β-葡聚糖刺激巨噬細(xì)胞生成NO和TNF-α中的作用.pdf

1、β-葡聚糖是真菌細(xì)胞壁含量最高的多糖，同時(shí)也是真菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)中最穩(wěn)定的部分，可以引發(fā)吞噬細(xì)胞的吞噬、釋放細(xì)胞因子等一系列天然免疫反應(yīng)。作為細(xì)胞壁的多糖成分，有多種生物學(xué)活性和免疫藥理學(xué)作用，己成為眾多領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。整體動(dòng)物試驗(yàn)研究表明，β-葡聚糖具有免疫調(diào)節(jié)作用，可以促進(jìn)動(dòng)物體內(nèi)免疫功能細(xì)胞分泌各種免疫活性因子，然后通過(guò)這些因子的介導(dǎo)，使整個(gè)免疫系統(tǒng)功能增強(qiáng)。 巨噬細(xì)胞在免疫系統(tǒng)中具有十分重要的地位，它通過(guò)吞噬、提呈抗原、激活

2、淋巴細(xì)胞、分泌和產(chǎn)生細(xì)胞因子、活性氧及NO等行使抗感染、抗腫瘤等生理功能，是機(jī)體免疫應(yīng)答、免疫調(diào)節(jié)中的重要環(huán)節(jié)。明確β-葡聚糖對(duì)巨噬細(xì)胞免疫功能的影響及其作用機(jī)理，對(duì)于闡明β-葡聚糖的免疫調(diào)節(jié)功能及其作用機(jī)制具有重要意義。 目前國(guó)內(nèi)關(guān)于β-葡聚糖免疫調(diào)節(jié)功能方面的研究不多，研究方法多以整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)為主，大多停留于蛋白質(zhì)水平，對(duì)于上游水平的研究非常少。本課題以小鼠單核/巨噬細(xì)胞RAW264.7細(xì)胞為研究對(duì)象，運(yùn)用細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)，采

3、用中性紅比色法檢測(cè)β-葡聚糖對(duì)巨噬細(xì)胞的增殖作用。用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)技術(shù)，檢測(cè)β-葡聚糖作用于巨噬細(xì)胞后對(duì)其產(chǎn)生NO和TNF-α的影響，并初步討論了MAPK通路在這一過(guò)程中的作用。用Western blot法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)MAPK信號(hào)通路的活化情況。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示β-葡聚糖對(duì)巨噬細(xì)胞的增殖和吞噬作用均呈雙相性。低濃度β-葡聚糖對(duì)RAW264.7細(xì)胞具有促進(jìn)作用，隨著β-葡聚糖濃度的逐漸增大，A值也不斷升高，至β-葡聚糖

4、濃度100μg/ml時(shí)達(dá)最高峰，同時(shí)可明顯提升其吞噬能力。但隨著β-葡聚糖濃度進(jìn)一步增高，A值反而下降，當(dāng)濃度為400μg/ml時(shí)幾乎完全抑制細(xì)胞的增殖作用；受β-葡聚糖刺激6小時(shí)后RAW264.7細(xì)胞開(kāi)始分泌TNF-α和NO，并隨著刺激時(shí)間的增長(zhǎng)，分泌量在不斷的增加，在24小時(shí)時(shí)達(dá)到高峰，隨著時(shí)間的推移，細(xì)胞因子的表達(dá)量也有所增加，但是增加量在逐漸減少。ERK1/2通路的抑制劑(PD98059)試驗(yàn)結(jié)果顯示其可抑制受刺激RAW264.

5、7細(xì)胞釋放TNf-α和NO。Western blot結(jié)果顯示，β-葡聚糖作用于小鼠巨噬細(xì)胞后，細(xì)胞內(nèi)MAPK通路ERK1/2和ERK5發(fā)生酪氨酸磷酸化，都參與到細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)中。以上結(jié)果顯示：β-葡聚糖對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞的增殖和吞噬的作用均呈雙相性；100μg/ml的β-葡聚糖激活巨噬細(xì)胞釋放NO和TNF-α的活性較強(qiáng)；β-葡聚糖使胞內(nèi)MAPK信號(hào)通路中的ERK5和ERK1/2發(fā)生酪氨酸磷酸化；ERK1/2通路不是β-葡聚糖誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞生