內(nèi)毒素在磨損顆粒刺激巨噬細(xì)胞產(chǎn)生炎癥和凋亡中的作用研究.pdf

1、研究背景：
　　磨損顆粒被認(rèn)為在骨溶解的發(fā)生和發(fā)展中起著關(guān)鍵性作用。磨損顆粒會(huì)激活巨噬細(xì)胞產(chǎn)生各種促炎癥因子（IL-1，11-6，TNF-α），從而導(dǎo)致一系列級(jí)聯(lián)反應(yīng)，最終導(dǎo)致假體無(wú)菌性松動(dòng)的發(fā)生。然而最近一系列的研究發(fā)現(xiàn)，完全去除內(nèi)毒素的磨損顆粒（包括金屬顆粒，聚乙烯顆粒，骨水泥顆粒）均不能誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生炎癥因子。由此可見(jiàn)，磨損顆粒刺激巨噬細(xì)胞產(chǎn)生炎癥因子的經(jīng)典無(wú)菌性松動(dòng)理論還有待探討。內(nèi)毒素與人類(lèi)許多疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。

2、但內(nèi)毒素在磨損顆粒刺激巨噬細(xì)胞產(chǎn)生炎癥和凋亡中的作用至今都不是很清楚，本文試圖做一解釋。
　　目的：
　　1.比較磨損顆粒內(nèi)毒素的不同清除方法和內(nèi)毒素檢測(cè)方法對(duì)磨損顆粒誘發(fā)炎癥因子的影響。
　　2.以含內(nèi)毒素的鈦顆粒模擬松動(dòng)假體周?chē)膩喤R床感染，在體外刺激巨噬細(xì)胞，觀察其凋亡情況。
　　3.含或不含內(nèi)毒素的磨損顆粒刺激巨噬細(xì)胞產(chǎn)生炎性因子的體內(nèi)外比較，觀察鈦顆粒在體內(nèi)外的不同炎性反應(yīng)。
　　4.去除內(nèi)毒素的

3、磨損顆粒在體內(nèi)產(chǎn)生炎癥因子的機(jī)制研究。
　　方法：
　　1.使用三種方法清除內(nèi)毒素，比較其清除能力以及對(duì)巨噬細(xì)胞的生物學(xué)影響。
　　2.使用含或不含內(nèi)毒素鈦顆粒，分別刺激巨噬細(xì)胞，觀察鈦顆粒和內(nèi)毒素對(duì)巨噬細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用和凋亡作用。
　　3.運(yùn)用ELISA和RealtimePCR反應(yīng)來(lái)證實(shí)(1)含有內(nèi)毒素的磨損顆粒是否能被巨噬細(xì)胞清除內(nèi)毒素，(2)不含內(nèi)毒素的磨損顆粒是否在體內(nèi)能刺激巨噬細(xì)胞產(chǎn)生炎性因子。

4、>　　4.觀察:(1)內(nèi)毒素和磨損顆粒粘附性。(2)人體正常水平內(nèi)毒素的濃度是否足以激活假體周?chē)捎谀p顆粒的產(chǎn)生而聚集的巨噬細(xì)胞？(3)體內(nèi)內(nèi)毒素水平的升高是否也會(huì)影響假體周?chē)奘杉?xì)胞的炎癥反應(yīng)？
　　結(jié)果：
　　1.強(qiáng)酸強(qiáng)堿反復(fù)處理，去除內(nèi)毒素的方法最好;去除鈦顆粒表面內(nèi)毒素后，幾乎不能誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生炎性因子。
　　2.隨著去除內(nèi)毒素的鈦顆粒濃度的增加，其對(duì)巨噬細(xì)胞的毒性和凋亡作用亦增加;而內(nèi)毒素在鈦顆粒低濃度時(shí)

5、無(wú)明顯影響，在鈦顆粒高濃度時(shí)明顯增強(qiáng)鈦顆粒對(duì)巨噬細(xì)胞的毒性和凋亡作用;含內(nèi)毒素的高濃度鈦顆粒其致凋亡途徑可能是由升高的NO和TNF-α引起的。
　　3.體外實(shí)驗(yàn)表明，無(wú)論含或不含內(nèi)毒素，經(jīng)巨噬細(xì)胞吞噬后，最終都無(wú)法誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生炎癥因子。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，含或不含內(nèi)毒素鈦顆粒誘導(dǎo)體內(nèi)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生炎性因子時(shí)僅在早期存在差異，后期沒(méi)有差異。但不含內(nèi)毒素的鈦顆粒氣囊與空白囊相比，確實(shí)存在比較多的炎性因子。
　　4.鈦顆粒和內(nèi)毒素在體

6、外沒(méi)有很強(qiáng)的黏附性;生理水平的內(nèi)毒素足以刺激巨噬細(xì)胞產(chǎn)生炎性反應(yīng);在相同生理水平的內(nèi)毒素情況下，局部聚集的巨噬細(xì)胞越多，其產(chǎn)生的炎癥水平也相對(duì)越高;體內(nèi)內(nèi)毒素有很強(qiáng)的穿透性，可異位影響遠(yuǎn)處聚集的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生炎性因子。
　　結(jié)論：
　　1.在使用磨損顆粒做炎癥研究時(shí)，必須使用正確的內(nèi)毒素去除和檢測(cè)方法，不然會(huì)導(dǎo)致研究結(jié)果不可信。
　　2.亞臨床感染和磨損顆粒共同作用可能是無(wú)菌性松動(dòng)假體周?chē)奘杉?xì)胞凋亡的真正原因。