線粒體通路介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡在內(nèi)毒素血癥心肌損傷中作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：復(fù)制內(nèi)毒素血癥心肌損傷的動(dòng)物模型，以細(xì)胞凋亡的線粒體通路為切入點(diǎn),研究線粒體通路介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡在內(nèi)毒素血癥大鼠心肌損傷中的機(jī)制及烏司他丁對(duì)該通路的影響，為臨床內(nèi)毒素血癥心肌損傷機(jī)制及防治提供動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的依據(jù)。
　　方法：將40只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為五組：正常對(duì)照組（NS組，n=8）、內(nèi)毒素12h組（LPS12h組，n=8）、24h組（LPS24h組，n=8），內(nèi)毒素+烏司他丁12h組（LPS+UTI12h組，n=8）、

2、24h組（LPS+UTI24h組，n=8）。內(nèi)毒素組：腹腔注射LPS（10mg/kg，用2mlNS溶解）；內(nèi)毒素+烏司他丁組：左側(cè)腹腔注射LPS（10mg/kg，用2mlNS溶解）1小時(shí)后，右側(cè)腹腔注射烏司他?。?萬(wàn)u/kg，用1mlNS溶解）；正常對(duì)照組：腹腔注射同等劑量生理鹽水。分別與12h、24h后處死動(dòng)物，按實(shí)驗(yàn)要求取材。具體檢測(cè)指標(biāo)：
　?、貶E染色法光鏡觀察各組大鼠心肌組織病理變化并計(jì)算心肌壞死面積百分比；
　　

3、②ELISA法檢測(cè)各組大鼠血清中肌鈣蛋白T(cTnT)、腦鈉肽（BNP）含量；
　　③用TUNEL法檢測(cè)各組大鼠心肌細(xì)胞凋亡并計(jì)算凋亡指數(shù)；
　　④用免疫組化方法檢測(cè)各組大鼠細(xì)胞凋亡信號(hào)傳導(dǎo)通路(線粒體通路)關(guān)鍵蛋白Bcl-2/Bax、CytC、Caspases-3的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.HE染色結(jié)果：光鏡下觀察：與正常對(duì)照組相比，內(nèi)毒素12h組24h組大鼠心肌組織損傷嚴(yán)重，內(nèi)毒素+烏司他丁12h、24h組

4、大鼠心肌組織雖然有損傷，但病變較同一時(shí)段內(nèi)毒素組輕，（P<0.01）。
　　2. ELISA法檢測(cè)結(jié)果：與正常對(duì)照組比較,內(nèi)毒素12h、24h組血清中cTnT、BNP濃度均升高（P<0.01），內(nèi)毒素+烏司他丁12h、24h組血清中cTnT、BNP較正常對(duì)照組升高，但較內(nèi)毒素組低（P<0.01）。
　　3.TUNEL結(jié)果：用TUNEL法檢測(cè)后，顯微鏡下觀察NS組大鼠心肌組織中未見陽(yáng)性表達(dá)的凋亡的細(xì)內(nèi)毒素+烏司他丁12h組、2

5、4h組雖有陽(yáng)性的細(xì)胞凋亡的表達(dá)，但較同一時(shí)間內(nèi)毒素組的表達(dá)少，（P<0.01）。
　　4.免疫組化結(jié)果顯示：①Bcl-2蛋白在正常對(duì)照組的大鼠心肌細(xì)胞中即有大量棕黃色的陽(yáng)性表達(dá)，內(nèi)毒素12h組、24h組，細(xì)胞漿中呈現(xiàn)淡黃色陽(yáng)性表達(dá)，(P　?、贐ax、CytC、Caspases-3蛋白在正常對(duì)照組大鼠心肌細(xì)胞中表達(dá)較少，內(nèi)