線粒體通路在應(yīng)力介導(dǎo)的成肌細(xì)胞凋亡中的作用及其調(diào)控機(jī)制.pdf_第1頁(yè)
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1、摘要目的:面頜部肌肉組織尤其是翼外肌在牙、頜、面部畸形的發(fā)生、發(fā)展、治療和療效維持中發(fā)揮著重要作用。功能矯形前伸下頜后,翼外肌的功能和結(jié)構(gòu)可以發(fā)生適應(yīng)性改建,這正是矯形治療得以成功并保持穩(wěn)定的關(guān)鍵,成肌細(xì)胞是適應(yīng)性改建的主要體現(xiàn)者。翼外肌的改建主要包括細(xì)胞的增殖、分化和凋亡,以往研究多局限于細(xì)胞的增殖與分化,而凋亡方面的研究少見(jiàn)。本研究擬通過(guò)構(gòu)建成肌細(xì)胞體外培養(yǎng)一力學(xué)刺激模型,探討周期性張應(yīng)力對(duì)成肌細(xì)胞凋亡的影響,明確線粒體通路在應(yīng)力介

2、導(dǎo)的成肌細(xì)胞凋亡中的作用及作用機(jī)制,從而闡明機(jī)械應(yīng)力下面頜肌細(xì)胞適應(yīng)性改建可能存在的內(nèi)在分子調(diào)控機(jī)制,將為口腔臨床醫(yī)生應(yīng)用不同方法誘導(dǎo)或調(diào)控面頜肌肉改建提供理論指導(dǎo)。方法:以大鼠L6成肌細(xì)胞為研究對(duì)象,在成功構(gòu)建成肌細(xì)胞體外培養(yǎng)一力學(xué)刺激模型的基礎(chǔ)上,通過(guò)多通道細(xì)胞牽張應(yīng)力加載系統(tǒng),分別對(duì)待測(cè)細(xì)胞持續(xù)施)JFllh、6h、12h、24h的周期性張應(yīng)力,加載力值為15%的細(xì)胞形變,頻率為10cycles/min,每一循環(huán)包括3sstret

3、ch/3srelaxation,不加力組為對(duì)照組;采用Hoechst33258熒光染料對(duì)凋亡細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察;應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分析成肌細(xì)胞的凋亡率;運(yùn)用RT—PCR和Westernblotting檢測(cè)周期性張應(yīng)力作用下各組之f司Caspase9和AIF的mRNA含量和蛋白含量;應(yīng)用Caspase9特異性抑制劑zLEHDFMK明確Caspase9在應(yīng)力介導(dǎo)的成肌細(xì)胞凋亡中的作用,進(jìn)一步明確線粒體途徑與應(yīng)力介導(dǎo)的成肌細(xì)胞凋亡的關(guān)系。采用統(tǒng)計(jì)

4、軟件SPSS170對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:1大鼠L6成肌細(xì)胞在受到15%,10cycles/min的周期性張應(yīng)力刺激后,可以保持良好的生長(zhǎng)狀態(tài),生物學(xué)特性良好,長(zhǎng)時(shí)間的張力刺激后,細(xì)胞呈現(xiàn)順應(yīng)力場(chǎng)方向排列趨勢(shì);Abstractobjective:Maxillofacialmuscleespeciallythelateralpterygoidmuscleplaysanimportantroleingenerating,develo

5、ping,treatingandretentionofdentofacialdeformityThestrU【ctureandfunctionoflateralpterygoidmusclecallbeadaptedafterfunctionalmandibularadvancementthatisthekeyofsuccessfulorthodontictreatmentMyoblastisthethemainvehicleforad

6、aptivereconstructionThereconstructionoflateralpterygoidmusclemainlyincludescellproliferationdifferentiationandapoptosisPreviousresearchislimitedtocellproliferationanddifferentiationbutapoptosisisrareTherefore,inthisstudy

7、,successfullyconstructsmyoblastinvitromodelofmechanicalstimulation,tostudyontheeffectsofdifferentmagnitudesofcyclicstretchonapoptosislevelsinmyoblastandtoinvestigatethepossiblemechanismsinvolvedandtheroleofmitochondrialp

8、athwayinthecyclicstretchinducedapoptosisofmyoblastsToclarifythepossibleinnermolecularregulationmechanismofmaxillofacialmuscleadaptivereconstructionwillprovidetheoreticalguidancetohelporalclinicaldoctorapplydifferentmetho

9、dstoinduceorcontroltheadaptivereconstructionofmaxillofacialmuscleMethods:Inthisresearch,ratsL6myoblastsweretheresearchobjectBasedonamyoblastsculturedinvitro—mechanicalstimulationmodel,itwoudthroughmulti—channelcellspulli

10、ngtensionstressloadingsystemtostretchthecellscontiuouslyfor16,12and24hoursrespectivelyLoadingforcevaluewas15%ofthecelldeformation,frequencyistencycles/min,eachcycleincluding3Sstretch/3S—relaxation,notstrengthgroupascontr

11、olgroupUsingHoechst33258fluorescentdyeonapoptosiscellsmorphologicalobservation;MyoblastscellsapoptosisrateWasanalyzedbyflowcytometry;Caspase9●andAIFmRNAcontentandproteincontentweredetectedbyRTPCRandWesternblotting;Caspas

12、e9specificinhibitorZLEHD——FMKWasappliedtocleartheroleofCaspase9instressmediatedmyoblastapoptosis,andtocleartherelationshipofraitochondrialpathwayandapoptoticcelldeathStatisticalanalysissoftware(SPSS17O)wasusedtoassessthe

13、differencebetweeneachgroupsResults:1TheRatL6myoblastscouldmaintainagoodstateofgrowthandthebiologicalcharacteristicsWasgoodafterimposedby15%,10cycles/mincyclicaltensilestressstimulationTheanangementofcellsfromdisorganized

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