超高壓液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)干血濾紙片上丙戊酸血藥濃度的研究.pdf

1、目的：建立并驗(yàn)證超高壓液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)干血濾紙片上丙戊酸血藥濃度的方法。
　　方法：樣品處理:30μL含丙戊酸的全血滴在濾紙上，室溫下晾干至少3個(gè)小時(shí)，待干透后從濾紙上打孔取下6mm直徑的血斑，放入2mL普通離心管中，加入含有一定濃度內(nèi)標(biāo)的超純水溶液150μL，超聲水浴10min，加入350μL乙腈，震蕩5min后離心10min，取上清液稀釋60倍進(jìn)樣。色譜條件:色譜柱為ACQUITYUPLC BEH C18 column

2、(1.7μm，2.1×100mm)，流動(dòng)相為乙腈-5mM醋酸銨(PH=7.8)(80:20％)，等度洗脫，流速0.5ml/min，柱溫50℃。質(zhì)譜條件:在A(yíng)PI5500型質(zhì)譜儀上完成檢測(cè)，負(fù)離子檢出模式，以質(zhì)荷比m/z143.0/143.0和120.9/67.8分別檢測(cè)丙戊酸和苯甲酸。方法學(xué)驗(yàn)證:包括線(xiàn)性、批內(nèi)/批間精密度與準(zhǔn)確度、特異性、提取回收率和介質(zhì)效應(yīng)、穩(wěn)定性、濾紙片的色譜效應(yīng)、全血體積和HCT值對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。方法應(yīng)用和比較

3、:用所建立的丙戊酸干血濾紙片UPLC-MS/MS法(DBS-UPLC-MS/MS)測(cè)定來(lái)自50名患者的50個(gè)臨床樣本，并將檢測(cè)結(jié)果與丙戊酸血漿UPLC-MS/MS法(Plasma-UPLC-MS/MS法)和丙戊酸熒光偏振免疫法(FPIA法)的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，使用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析并作圖。
　　結(jié)果：在上述的色譜-質(zhì)譜條件下，丙戊酸和苯甲酸的保留時(shí)間在0.57和0.48min，基線(xiàn)平穩(wěn)，峰形可，無(wú)雜峰干擾。丙戊酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)線(xiàn)性范圍為

4、5-160μg/mL，r=0.9978。高、中、低濃度質(zhì)控及定量下限的精密度和準(zhǔn)確度均符合要求。丙戊酸的提取回收率為82.0-88.4％，無(wú)明顯的介質(zhì)效應(yīng)。干血濾紙片樣品穩(wěn)定性良好，可在室溫下穩(wěn)定存放至少7d，在4℃下穩(wěn)定存放至少10d，在50℃下存放1d，在-20℃下可存放至少30d。未檢測(cè)到濾紙片的色譜效應(yīng)。使用不同體積(30μL、50μL)的全血滴在濾紙上或不同HCT值(25％、35％、45％、55％)的全血對(duì)檢測(cè)結(jié)果無(wú)明顯影響。

5、比較DBS-UPLC-MS/MS法、Plasma-UPLC-MS/MS法和FPIA法，Passing-Bablok回歸分析提示DBS-UPLC-MS/MS法和Plasma-UPLC-MS/MS法一致性較好，F(xiàn)PIA法與DBS-UPLC-MS/MS法、Plasma-UPLC-MS/MS法一致性較差;Bland-Altman差異圖提示DBS-UPLC-MS/MS法與Plasma-UPLC-MS/MS法檢測(cè)的丙戊酸濃度低于FPIA法測(cè)得值，而