食管癌外周血液、骨髓微轉(zhuǎn)移的分子診斷研究.pdf

1、目的 該研究旨在探討食管癌病人在接受治療時(shí)是否已經(jīng)發(fā)生骨髓和外周血液的微轉(zhuǎn)移，為食管癌的正確治療方案從微轉(zhuǎn)移方面提供客觀的依據(jù)。 細(xì)胞角蛋白(cytokeratin，CK)是上皮細(xì)胞骨架的組成成分，表達(dá)于正常上皮以及上皮源性原發(fā)腫瘤及其轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞，而在血液、骨髓、淋巴結(jié)中無(wú)表達(dá)，所以一旦在血液、骨髓、淋巴結(jié)中有表達(dá)，如果患者體內(nèi)有來(lái)源于上皮的原發(fā)腫瘤病灶，說(shuō)明可能有轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞存在。CK至少有二十種成分，CK18、CK1

2、9是目前報(bào)道食管癌微轉(zhuǎn)移中公認(rèn)的腫瘤標(biāo)志物，而癌胚抗原CEA在食管癌病人的血液和骨髓中有很高的表達(dá)，尤其在食管癌轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的病人中。所以該課題選定此三種靶基因，為此次微轉(zhuǎn)移研究的腫瘤標(biāo)志物。 該課題采用巢式RT-PCR等先進(jìn)的生物學(xué)技術(shù)，以食管癌患者外周血、骨髓血淋巴細(xì)胞為材料，檢測(cè)CK18、CK19、CEA靶基因，探討食管癌患者在接受治療時(shí)骨髓包括髂骨、胸骨、肋骨及外周血液是否發(fā)生微轉(zhuǎn)移；比較髂骨、胸骨、肋骨骨髓及外周血液中三

3、個(gè)靶基因的陽(yáng)性表達(dá)率，并分析其陽(yáng)性表達(dá)率與食管癌TNM分期和臨床病理分化之間的關(guān)系；研究食管癌患者骨髓、外周血液中CK18mRNA、CK19mRNA、CEAmRNA陽(yáng)性表達(dá)率對(duì)微轉(zhuǎn)移預(yù)測(cè)的價(jià)值，探索應(yīng)用于臨Ⅱ床檢測(cè)食管癌微轉(zhuǎn)移的方法和靶基因。 第一部分食管癌無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者外周血液微轉(zhuǎn)移研究 目的： (1)探討CK18、CK19和CEA基因在食管癌無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者中外周血液中的表達(dá)情況。 (2)比較三個(gè)靶基因

4、在外周血液陽(yáng)性表達(dá)率。 (3)探討三個(gè)靶基因陽(yáng)性表達(dá)率與臨床病理分期和病理分化之間的關(guān)系。 方法 采用巢式－反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Nested-RT-PCR)方法檢測(cè)50例無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移食管癌患者外周血液中CK18mRNA、CK19mRNA和CEAmRNA的表達(dá)，并與臨床病理因素進(jìn)行分析。 結(jié)果： (1)50例無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移食管癌患者外周血中CK18mRNA、CK19mRNA、CEAmRNA表達(dá)陽(yáng)性率分別為

5、(19/50)38.0％、(22/50)44.0％、(16/50)30.2％。 (2)TNM分期Ⅱa、Ⅱb、Ⅲ期三個(gè)靶基因陽(yáng)性率有增高趨勢(shì)，但相比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，其陽(yáng)性率與病理分化無(wú)相關(guān)性(P＞0.05)。(3)2例0期患者三基因沒(méi)有表達(dá)，2例Ⅰ期患者有1例三基因均表達(dá)陽(yáng)性。 結(jié)論： (1)巢式RT-PCR檢測(cè)食管癌患者外周血液微轉(zhuǎn)移是敏感可行的方法。 (2)檢測(cè)食管癌患者外周血液中微轉(zhuǎn)移

6、有助于判斷腫瘤進(jìn)展程度。 (3)早、中期食管癌存在外周血液微轉(zhuǎn)移的可能。 第二部分食管癌無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者骨髓微轉(zhuǎn)移研究 目的： (1)探討CK18mRNA、CK19mRNA和CEAmRNA在食管癌無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者骨髓中的表達(dá)情況。 (2)比較髂骨、胸骨及肋骨骨髓中三基因的表達(dá)率。 (3)探討三個(gè)靶基因陽(yáng)性表達(dá)率與臨床病理分期和病理分化的關(guān)系。方法：采用巢式－反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Nested-

7、RT-PCR)方法檢測(cè)50例無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移食管癌患者骨髓中CK18mRNA、CK19mRNA和CEAmRNA基因的表達(dá)，并與臨床病理因素進(jìn)行分析。 結(jié)果： (1)50例無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移食管癌患者肋骨骨髓中CK18mRNA、CK19mRNA、CEAmRNA表達(dá)陽(yáng)性率分別為(21/50)42.0％、(26/50)52.0％、(18/50)36.0％。胸骨骨髓表達(dá)陽(yáng)性率分別為(9/25)36.0％、(10/25)40.0％、(8/25)

8、32.0％。髂骨骨髓(單側(cè))表達(dá)陽(yáng)性率分別為(7/25)28.0％、(9/25)36.0％、(7/25)28.0％。 (2)TNM分期Ⅱa、Ⅱb、Ⅲ期三個(gè)靶基因陽(yáng)性率有增高趨勢(shì)，但相比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，其陽(yáng)性率與病理分化無(wú)相關(guān)性(P＞0.05)。 (3)2例0期患者三基因沒(méi)有表達(dá)，2例Ⅰ期患者有1例CK18mRNA、CK19mRNA、CEAmRNA在肋骨骨髓中均表達(dá)陽(yáng)性。 結(jié)論： (1)擴(kuò)增

9、CK18mRNA、CK19mRNA、CEAmRNA的巢式RT-PCR檢測(cè)食管癌患者骨髓微轉(zhuǎn)移是敏感可行的方法。肋骨骨髓陽(yáng)性表達(dá)率最高，髂骨骨髓最低。 (2)檢測(cè)食管癌患者骨髓中微轉(zhuǎn)移有助于判斷腫瘤進(jìn)展程度。 (3)早、中期食管癌存在骨髓微轉(zhuǎn)移的可能。 第三部分食管癌Ⅳ期外周血液、骨髓微轉(zhuǎn)移研究 目的： (1)探討CK18mRNA、CK19mRNA和CEAmRNA在食管癌Ⅳ期患者和良性食管病患者外

10、周血液、骨髓中的表達(dá)情況。 (2)探討三基因在健康獻(xiàn)血者外周血液中的陽(yáng)性表達(dá)率。 方法： 采用巢式－反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Nested-RT-PCR)方法檢測(cè)10例食管癌Ⅳ期患者和10例良性食管病患者外周血液、骨髓中和10例健康獻(xiàn)血者外周血液中CK18mRNA、CK19mRNA和CEAmRNA的表達(dá)。 結(jié)果： (1)10例食管癌Ⅳ期患者外周血中CK18mRNA、CK19mRNA、CEAmRNA表達(dá)陽(yáng)

11、性率分別為(9/10)90.0％、(9/10)90.0％、(8/10)80.0％。 其髂骨骨髓(單側(cè))中三個(gè)靶基因陽(yáng)性表達(dá)率分別為(10/10)100.0％、(10/10)100.0％、(9/10)90.0％。 (2)10例良性食管病患者外周血液、骨髓中三基因均陰性。 (3)10例健康獻(xiàn)血者外周血液中三基因均陰性。 結(jié)論： (1)擴(kuò)增CK18mRNA、CK19mRNA、CEAmRNA的巢式RT-P