黃連素抗氧化活性及其對癌細胞毒性的研究.pdf

1、黃連素是從黃連、黃柏、三棵針等數(shù)十種中藥中提取的一種季胺類化合物,屬于異喹啉生物堿,具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗心律失常、抗心力衰竭、保護缺血心肌、抑制血管平滑肌增殖、降血壓、降血脂、降血糖、抗血小板聚集等藥理活性。近年來,對其抗氧化活性及抗癌活性的研究備受人們關(guān)注。
　　本文以黃連素為材料,測定了它在體外的抗氧化及抗癌活性。采用MDA測定、瓊脂糖凝膠電泳、彗星電泳技術(shù)和SDS-PAGE法,檢測了對脂質(zhì)過氧化、DNA氧化斷裂和蛋白質(zhì)

2、氧化損傷的保護作用;用黃嘌呤氧化酶-NBT還原法、甲基紫法、DMPD·+法及Oyaiuz法測定清除超氧陰離子、羥自由基及DMPD·+自由基的能力和還原力的大小。還檢測了黃連素對肝癌細胞株HepG2和白血病細胞株K562的毒性、對細胞增殖的抑制作用、對K562細胞DNA的損傷作用和誘導K562細胞凋亡作用。結(jié)果如下:
　　(1)黃連素對生物大分子的氧化損傷有較好的保護作用。在抑制脂質(zhì)過氧化時,濃度為5μmol·L-1時,抑制率為1.

3、6％;320μmol·L-1時,抑制率達到95.5%。在保護DNA的氧化斷裂時,在10mmol·L-1AAPH引發(fā)的質(zhì)粒pBR322DNA氧化的體系中,低濃度下(5μmol·L-1)其對DNA氧化斷裂有微弱的保護作用;80μmol·L-1時基本完全保護DNA的氧化斷裂。在50μmol·L-1H2O2誘導的人外周血單個核細胞DNA氧化損傷的模型中,6.25μmol·L-1黃連素使細胞DNA損傷顯著減少,損傷率從81.7%降至66.2%;當

4、濃度達到100μmol·L-1時,損傷率降為48.4%。黃連素對蛋白質(zhì)氧化損傷的保護作用與Trolox接近,320μmol·L-1時,均可完全保護蛋白質(zhì)不被氧化降解。
　　(2)黃連素在體外有較強的清除自由基的能力和還原力。它對超氧陰離子的清除效果優(yōu)于Trolox,濃度為160μmol·L-1時,其清除率已達到99.2%。對羥自由基也具有很好的清除作用,與Trolox的清除效果基本相當,當濃度為160μmol·L-1時,清除率分別

5、達到91.0%和96.0%。在FeCl3引發(fā)的氧化體系中,黃連素清除DMPD·+的作用較弱,濃度達到1280μmol·L-1時,清除率只達到35.0%。此外,Oyaiuz法表明黃連素還具有較好的還原力。
　　(3)在對肝癌細胞株HepG2和白血病細胞株K562的抑制作用中,黃連素可明顯抑制兩種癌細胞的增殖,且具有濃度和時間依賴性;黃連素處理24、48h后,對HepG2細胞的IC50分別為19μmol·L-1和9μmol·L-1;對

6、K562細胞的IC50分別為11μmol·L-1和3μmol·L-1,表明對兩種細胞都具較高毒性,而且K562細胞對黃連素更敏感;在較高濃度(80、160μmol·L-1)處理48h可引起兩種癌細胞死亡。
　　(4)在用彗星電泳技術(shù)檢測黃連素對K562細胞DNA的損傷作用中,處理細胞48h后,2.5μmol·L-1時,損傷率為23.4%(基礎(chǔ)損傷率為10.0%);當濃度為160μmol·L-1時,損傷率已達到92.8%。說明高濃度

7、黃連素可引起嚴重的K562細胞DNA的損傷。
　　(5)在AO/EB雙染法檢測黃連素誘導K562細胞凋亡的實驗中,作用呈濃度和時間依賴關(guān)系。處理細胞24h后,40μmol·L-1和160μmol·L-1黃連素處理組細胞凋亡率分別為16.9%和29%(對照細胞凋亡率為10.1%);處理48h后,160μmol·L-1時凋亡率達到75.2%(對照細胞凋亡率為5.2%)。
　　綜上,黃連素在體外多個體系中有較好的抗氧化活性;對肝癌