黃連和小檗堿對(duì)三種體外培養(yǎng)細(xì)胞毒性的初步研究.pdf

1、黃連及其主要成分小檗堿具有抗菌、抗炎和抗氧化等多種功能，臨床應(yīng)用廣泛。但在疾病治療過程中，黃連和小檗堿也表現(xiàn)出一些毒性反應(yīng)，因此國(guó)內(nèi)已有學(xué)者對(duì)黃連的基礎(chǔ)毒性進(jìn)行了相關(guān)研究，但是關(guān)于黃連和小檗堿的細(xì)胞毒性作用未見報(bào)道。故本試驗(yàn)以BRL細(xì)胞、NRL細(xì)胞和L929細(xì)胞為研究對(duì)象，從細(xì)胞水平上探討黃連和小檗堿的安全性，旨在揭示黃連和小檗堿的細(xì)胞毒性及其作用機(jī)制，為黃連在臨床上的合理應(yīng)用提供參考。
　　試驗(yàn)首先將黃連、小檗堿分別倍比稀釋成1

2、0個(gè)不同濃度梯度，然后與培養(yǎng)24h的單層BRL細(xì)胞、NRL細(xì)胞和L929細(xì)胞共培養(yǎng)，采用CCK-8法檢測(cè)不同濃度的2種藥物對(duì)3種細(xì)胞增殖（或抑制）的影響，依據(jù)CCK-8檢測(cè)結(jié)果，選取對(duì)細(xì)胞具有較高抑制率的藥物濃度（對(duì)3種細(xì)胞的抑制率約為75％，以下簡(jiǎn)稱“高劑量”），較低抑制率的藥物濃度（對(duì)3種細(xì)胞的抑制率約為25%，以下簡(jiǎn)稱“中劑量”）和不產(chǎn)生抑制作用的藥物濃度（對(duì)3種細(xì)胞的抑制率約為0%，以下簡(jiǎn)稱“低劑量”）分別作用于三種細(xì)胞，用An

3、nexin V-FITC和PI雙染檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，JC-1染色檢測(cè)細(xì)胞線粒體膜電位變化。結(jié)果如下：
　　1. CCK-8檢測(cè)結(jié)果顯示，黃連濃度在高于0.19mg/mL、1.56mg/mL、1.56mg/mL時(shí)，分別對(duì)BRL細(xì)胞、NRK細(xì)胞、L929細(xì)胞的增殖有抑制作用，小檗堿濃度在高于0.0338 mg/mL、0.0338 mg/mL、0.0169 mg/mL時(shí)，分別對(duì)三種細(xì)胞增殖有抑制作用；黃連濃度低于0.1 mg/mL、0.7

4、8mg/mL、0.78 mg/mL時(shí)，分別對(duì)BRL細(xì)胞、NRK細(xì)胞、L929細(xì)胞的增殖有促進(jìn)作用，小檗堿濃度低于0.0169 mg/mL、0.0169 mg/mL、0.0084 mg/mL時(shí)，分別對(duì)三種細(xì)胞增殖有促進(jìn)作用。黃連和小檗堿對(duì)3種細(xì)胞的IC50均為NRK細(xì)胞>L929細(xì)胞>BRL細(xì)胞；黃連和小檗堿對(duì)3種細(xì)胞毒性反應(yīng)分級(jí)結(jié)果顯示兩種藥物均對(duì)BRL細(xì)胞的毒性最大。
　　2.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡試驗(yàn)結(jié)果顯示，高、中、低劑量黃

5、連誘導(dǎo)細(xì)胞的總凋亡率（%），BRL細(xì)胞分別為3.115±0.019、1.659±0.017、0.055±0.001，NRK細(xì)胞分別為5.040±0.030、3.458±0.025、1.972±0.015，L929細(xì)胞分別為5.980±0.055、4.790±0.040、3.300±0.079；高、中、低劑量小檗堿誘導(dǎo)細(xì)胞的總凋亡率（%）BRL細(xì)胞分別為3.493±0.006、1.923±0.013、0.864±0.009，NRK細(xì)胞分別

6、為4.906±0.030、2.344±0.015、1.958±0.015，L929細(xì)胞分別為5.554±0.021、4.790±0.040、3.784±0.045；以上結(jié)果顯示黃連和小檗堿均能誘導(dǎo)BRL細(xì)胞、NRK細(xì)胞、L929細(xì)胞發(fā)生凋亡，細(xì)胞凋亡率均隨藥物濃度降低而下降，呈劑量依賴性。
　　3. JC-1熒光染色法檢測(cè)細(xì)胞線粒體膜電位變化結(jié)果顯示，高、中、低劑量黃連誘導(dǎo)細(xì)胞的線粒體膜電位紅綠熒光比值BRL細(xì)胞分別為0.336±

7、0.036、2.479±0.025、6.114±0.053，NRK細(xì)胞分別為0.669±0.031、1.586±0.044、4.484±0.0312，L929細(xì)胞分別為1.070±0.064、1.260±0.031、1.700±0.034；高、中、低劑量小檗堿誘導(dǎo)細(xì)胞的線粒體膜電位紅綠熒光比值BRL細(xì)胞分別為0.388±0.023、2.624±0.009、9.281±0.055，NRK細(xì)胞分別為0.540±0.036、0.911±0.0