三氯化鋁對雞脾淋巴細胞毒性的體外研究.pdf

1、以體外培養(yǎng)1月齡伊莎蛋雛雞脾臟淋巴細胞為研究對象，在培養(yǎng)液中添加不同濃度的三氯化鋁(AlCl3)，對照組添加相同體積的培養(yǎng)液，應(yīng)用MTT比色法、放免法、半定量RT-PCR和流式細胞術(shù)等方法觀測鋁對雞脾臟淋巴細胞活性、細胞增殖、免疫細胞因子、抗氧化功能、鈣穩(wěn)態(tài)及細胞凋亡等的影響，旨在探討鋁對雞免疫細胞毒作用及其機制，為鋁毒危害的解除提供理論依據(jù)。研究結(jié)果表明： 1.應(yīng)用臺盼藍排斥試驗和MTT比色法測得染鋁24h后雞脾臟淋巴細胞的半

2、數(shù)抑制濃度(IC50)為0.832±0.01mg/ml。 2.經(jīng)MTT比色法測得低劑量鋁能明顯抑制T細胞增殖，對B細胞增殖不起作用，高劑量鋁對T、B細胞增殖均起抑制作用。 3.鋁可增加淋巴細胞內(nèi)乳酸脫氫酶(LDH)的漏出率，導(dǎo)致細胞活性下降，說明鋁可改變淋巴細胞膜通透性。 4.染鋁組脾淋巴細胞培養(yǎng)液中白介素-2(IL-2)和腫瘤壞死因子(TNF-α)含量低于對照組，組間差異顯著或極顯著(p＜0.01；p＜0.05

3、)，且染鋁濃度和它們的含量呈負相關(guān)，提示IL-2和TNF-α含量的減少可能是鋁致免疫毒性的機理之一。 5.染鋁組雞脾淋巴細胞內(nèi)一氧化氮合酶(NOS)活性、一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)含量高于對照組，超氧化物岐化酶(SOD)和谷胱苷肽過氧化物酶(GSH-Px)活性低于對照組，組間差異顯著或極顯著(p＜0.01；p＜0.05)，且呈現(xiàn)劑量-效應(yīng)關(guān)系。說明鋁可引發(fā)雞脾臟淋巴細胞氧化脅迫，進而發(fā)揮其免疫細胞毒作用。 6.應(yīng)

4、用流式細胞術(shù)和吖啶橙-溴化乙錠(AO/EB)雙熒光染色法分別從生化改變和形態(tài)學(xué)角度檢測了鋁致雞脾臟淋巴細胞凋亡情況。隨染鋁濃度的增加，淋巴細胞膜皺縮、出芽、胞漿稀少、染色體固縮、邊聚、碎裂等典型凋亡特征的細胞數(shù)逐漸增多；G0/G1期細胞數(shù)量逐漸增加，S和G2/M期細胞數(shù)量逐漸減少，細胞增殖指數(shù)降低；凋亡指數(shù)和細胞凋亡率升高，染鋁組與對照組間比較差異均極顯著(p＜0.01)。表明鋁可通過誘導(dǎo)免疫細胞凋亡發(fā)揮免疫毒性作用。 7.隨染