樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)的特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞抗甲狀腺髓樣癌的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　 利用人體外周血來源的樹突狀細(xì)胞(dendriticcells,DCs)強(qiáng)大的抗原提呈能力和激活T細(xì)胞尤其是初始型T細(xì)胞的能力,探討轉(zhuǎn)染人甲狀腺髓樣癌細(xì)胞系總RNA的DC疫苗體外誘導(dǎo)特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)增殖和殺傷靶細(xì)胞的效率。
　　 方法:
　　 采集正常志愿者抗凝的新鮮外周血,應(yīng)用淋巴細(xì)胞分離液(Ficoll)用貼壁的方法分離單個(gè)核細(xì)胞(PBMC),經(jīng)重組人粒細(xì)胞.巨噬細(xì)胞集落刺激因子

2、(rhGM-CSF)、重組人白細(xì)胞介素4(rhIL-4),體外誘導(dǎo)培養(yǎng)獲取未成熟DC(imDC)。從甲狀腺髓樣癌細(xì)胞系提取總RNA后轉(zhuǎn)染DC,流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后DC表面CD83,CD86,CD11c,CD14及HLA-DR表型的變化；同時(shí)經(jīng)重組人白細(xì)胞介素2(rhIL-2)誘導(dǎo)擴(kuò)增T淋巴細(xì)胞,轉(zhuǎn)染后的DC與自體T淋巴細(xì)胞混合,刺激T淋巴細(xì)胞得到腫瘤抗原特異的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL),流式細(xì)胞儀檢測(cè)刺激前后CD3/CD4,CD3/

3、CD8的變化。MTT法檢測(cè)致敏DC對(duì)T淋巴細(xì)胞增殖的影響和致敏DC活化的特異性CTL對(duì)甲狀腺髓樣癌細(xì)胞系總RNA轉(zhuǎn)染的DC的體外殺傷效率。
　　 結(jié)果:
　　 提取甲狀腺髓樣癌細(xì)胞系總RNA,電泳顯示完整未降解。體外誘導(dǎo)人外周血單個(gè)核細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示:未加脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)培養(yǎng)的DC低表達(dá)CD83,CD86,CD11c,為未成熟DC,符合轉(zhuǎn)染要求；加LPS或甲狀腺髓樣癌細(xì)胞系總

4、RNA培養(yǎng)的DC,高表達(dá)CD83,CD86,CD11c,為成熟DC,其形態(tài)典型、具備強(qiáng)烈刺激增殖的能力。轉(zhuǎn)染后DC刺激自體T淋巴細(xì)胞5天后,CD8+的CTL比例上升(P<0.01)。甲狀腺髓樣癌細(xì)胞系總RNA致敏DC刺激T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為CTL后,MTT法檢測(cè)其對(duì)新轉(zhuǎn)染甲狀腺髓樣癌細(xì)胞系總RNA的DC細(xì)胞的殺傷效應(yīng),結(jié)果表明:隨著效靶比增加,其殺傷效應(yīng)亦顯著增加(P<0.01)。
　　 結(jié)論:
　　 甲狀腺髓樣癌細(xì)胞系總R