黃連須和小檗堿對草魚出血病的預(yù)防作用及其機(jī)理.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、草魚(Ctenopharyngodon idella)出血病,主要癥狀為體表出血,爛鰓,潰瘍,膿腫,突眼和腹脹。該疾病具有傳染性強(qiáng)、發(fā)病快和死亡率高的特點(diǎn)。目前,國內(nèi)外主要使用抗生素來抵制細(xì)菌引起的疾病,但是長期應(yīng)用抗生素會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性和藥物殘留等一系列問題。雖然接種疫苗可以有效的預(yù)防魚類感染疾病,但是它的使用不便是限制其應(yīng)用于在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中的主要因素。漁用中草藥的復(fù)方配伍是近年來研究的一個(gè)熱點(diǎn),資源豐富、低毒、低殘留等優(yōu)點(diǎn)。因此,從

2、中藥中篩選出可以有效防治出血病的藥物對于養(yǎng)殖業(yè)來說意義十分重大。
  黃連作為一種常用的傳統(tǒng)藥材已有數(shù)千多年的歷史,主要活性成分為小檗堿、黃連堿、巴馬汀、表小檗堿和藥根堿等其他生物堿。黃連生物堿具有相同的母核結(jié)構(gòu),可能表現(xiàn)出相似的藥理性質(zhì)。實(shí)驗(yàn)以草魚作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,研究黃連須和小檗堿對嗜水氣單胞菌的抗菌作用以及提高非特異性免疫功能,而增強(qiáng)草魚抵抗出血病的能力,并初步探討了黃連生物堿對對草魚相關(guān)免疫因子的影響作用。本課題的主要研究內(nèi)容

3、和結(jié)果如下:
  1.黃連須和小檗堿對嗜水氣單胞菌的體外抑制作用的檢測,采用二倍稀釋法。最小抑菌濃度(MIC)的結(jié)果顯示,黃連須和小檗堿均表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制效果。最小抑菌濃度分別是3.125 mg/mL和39.062 mg/L。
  2.在研究黃連須和小檗堿對感染嗜水氣單胞的草魚存活率影響的實(shí)驗(yàn)中,隨機(jī)將體重大致相同的健康草魚分成7組,分別為正常對照組,模型組,1.00%黃連須組,0.50%黃連須組,0.25%黃連須組,0.1

4、0%黃連須組和0.05%小檗堿組。實(shí)驗(yàn)分為治療性實(shí)驗(yàn)和預(yù)防性試驗(yàn)2個(gè)部分。在2次實(shí)驗(yàn)期間,對照組和模型組的草魚始終投喂基礎(chǔ)飼料。實(shí)驗(yàn)組的草魚投喂相應(yīng)的含藥飼料,每天2次。在預(yù)防性實(shí)驗(yàn)中,喂養(yǎng)14天后,除了對照組外,其它各組的草魚均腹腔注射0.2 mL嗜水氣單胞菌的菌懸液,對照組腹腔注射0.2 mL無菌的生理鹽水。記錄感染細(xì)菌14天后各組的死亡情況。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次,最終取3次存活率的平均值進(jìn)行比較。結(jié)果顯示,與模型組比較,各實(shí)驗(yàn)組均提高了感

5、染嗜水氣單胞菌后的草魚存活率。0.50%黃連須組效果最好,存活率為74.29%。對照組沒有死亡情況出現(xiàn)。在治療性實(shí)驗(yàn)一開始時(shí),實(shí)驗(yàn)組的所有魚均腹腔注射0.2 mL嗜水氣單胞菌的菌懸液,對照組注射0.2 mL無菌的生理鹽水。記錄喂養(yǎng)14天后各組的死亡情況。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次,最終取3次的存活率的平均值進(jìn)行比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn),與模型組比較,實(shí)驗(yàn)組的存活率均有不同程度的增加。存活率最高的是0.05%小檗堿組67.14%。對照組沒有死亡情況出現(xiàn)。2次實(shí)驗(yàn)

6、表明,黃連須和小檗堿可以增強(qiáng)草魚抵抗感染嗜水氣單胞菌的能力。
  3.在研究黃連須和小檗堿對草魚非特異性免疫功能影響的實(shí)驗(yàn)中,體重大致相同的健康的草魚被隨機(jī)且平均地分成6組:對照組,1.00%黃連須組,0.50%黃連須組,0.25%黃連須組,0.10%黃連須組和0.05%小檗堿組。實(shí)驗(yàn)期間,對照組的草魚始終投喂基礎(chǔ)飼料,5個(gè)實(shí)驗(yàn)組的草魚投喂相對應(yīng)的含藥飼料,每天2次,為期28天。在第14和第28天,從所有組中隨機(jī)選取6條魚進(jìn)行尾靜

7、脈取血,用于血清溶菌酶活性、NBT活性和補(bǔ)體C3水平的測定。結(jié)果發(fā)現(xiàn),實(shí)驗(yàn)期間,與對照組比較,各實(shí)驗(yàn)組草魚的免疫指標(biāo)均有所提高。在第14天,1.00%黃連須組的血清溶菌酶活性與對照組比較達(dá)到顯著性差異。在第14天,0.50%黃連須組增加的NBT活性最高。在第28天,僅1.00%黃連須組的補(bǔ)體C3水平與對照組相比較表現(xiàn)出顯著性差異。結(jié)果表示,飼料中添加黃連須和小檗堿可以提高草魚的非特異性免疫能力。
  4.在研究黃連生物堿對草魚相關(guān)

8、免疫因子影響的實(shí)驗(yàn)中,健康的草魚被隨機(jī)分成5組:對照組,0.05%小檗堿組,0.05%黃連堿組,0.05%表小檗堿組和0.05%巴馬汀組。實(shí)驗(yàn)期間,對照組的草魚始終投喂基礎(chǔ)飼料,4個(gè)實(shí)驗(yàn)組的草魚投喂相對應(yīng)的含藥飼料,每天2次,為期14天。14天后,檢測草魚3種免疫因子:白介素-1β(IL-1β)、干擾素(IFN)和腫瘤壞死因子α(TNFα)在肝臟、腸和脾臟中的水平。檢測IL-1β的結(jié)果中發(fā)現(xiàn),巴馬汀對肝臟、腸和脾臟中的IL-1β的水平表

9、現(xiàn)出提升的作用;黃連堿對肝臟和腸中的IL-1β的水平表現(xiàn)出提升作用;而小檗堿僅對腸中的IL-1β的水平具有提高作用。檢測IFN的結(jié)果中發(fā)現(xiàn),各實(shí)驗(yàn)組肝臟中的IFN的水平均表現(xiàn)出降低作用;而各實(shí)驗(yàn)組脾臟中的IFN的水平均表現(xiàn)出提升作用;僅巴馬汀對腸中的IFN的水平具有提高作用。檢測TNFα的結(jié)果中發(fā)現(xiàn),巴馬汀和黃連堿對肝臟中的TNFα的水平表現(xiàn)出升高作用;各實(shí)驗(yàn)組對脾臟中的TNFα的水平均表現(xiàn)為降低作用;巴馬汀和黃連堿對腸中的TNFα的水

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